门静脉注射小鼠Hepcidin基因特异性RNAi腺病毒的方法研究.pdfVIP

胸段硬膜外阻滞对大鼠肠缺血再灌注损伤后Cajal间质细胞的影响 周波 陈国忠 南京军区福州总医院麻醉科 福州市 350025 [摘要] 目的 研究硬膜外阻滞对肠I/R损伤后Cajal间质细胞的作用及机制。方法 Wistar大鼠32只随机分为四组(n=8)：S组 （假手术组）、I/R组(肠缺血45min再灌注12h)、 NS组 （肠I/R损伤，胸段硬膜外生理盐水治疗组）、TEA组 （肠I/R损伤，胸段硬膜外罗 哌卡因治疗组）。小肠标本HE染色、免疫组织化学染色及QRT-PCR测c-Kit的表达量。 结果Chiu，S评分:I/R组和NS组评分高于S组(P＜0.05);TEA组评分结构低于I/R组 和NS组，高于S组，但差异尚不具有统计学意义(P＞0.05)；免疫组化及QRT-PCR结果： QRT-PCR结果与免疫组化结果一致，/IR组和NS组c-Kit的表达低于S组 （P＜0.01），TEA 组c-Kit的表达低于S组，高于I/R组和NS组(P＜0.05)。NS组与I/R组相比差异无 统计学意义(P＞0.05)。 [关键词]硬膜外阻滞;缺血再灌注损伤;Cajal间质细胞;肠 门静脉注射小鼠Hepcidin基因特异性RNAi腺病毒的方法研究 朱志鹏 嘉兴市第二医院麻醉科 [摘要] 目的 门静脉注射小鼠hepcidin基因特异性小发夹RNA(shRNA)重组腺病 毒干扰载体，观察其对肝脏hepcidinmRNA的干扰效果。方法 根据genbank小鼠hepcidin 基因序列及相关文献，设计shRNA并合成1对互补的DNA单链寡核苷酸，退火后克 隆至线性化pENTR/U6入门载体，以CMV-EGFP改造载体，利用Invitrogen公司LR 重组系统与pAd/BLOCK-IT-DEST进行重组，构建pAD-U6-shRNA-CMV-EGFP腺病毒 载体，转染293A细胞进行包装、扩增，获得腺病毒。实验组用balb/c小鼠麻醉后行病 毒门静脉注射，常规饲养10d后取成活小鼠肝组织，Trizol法提取RNA，半定量PT-PCR 法检测mRNA表达。另检测正常小鼠肝脏mRNA表达作对照。结果 经测序鉴定证实 pAD-U6-shRNA-CMV-EGFP腺病毒载体构建成功，获得病毒的滴度为：2.7×109 ifu/ml。 [关键词]hepcidin;腺病毒载体；门静脉；基因治疗 七氟醚和异氟醚急性暴露对神经干细胞增殖和发育调控基因的影响 刘劲 连庆泉 林函 浙江省温州市温州医学院附属第二医院麻醉科 325027 [摘要]目的：观察七氟醚和异氟醚对SD大鼠大脑皮质神经干细胞增殖的影响，检测 神经干细胞发育调控基因stat3，sox2，notchl和p21的表达。 方法:1、分离E15天SD大鼠皮层进行神经干细胞原代培养。以(1-2)*106/ml细胞 密度接种，在含有2％ B27，20ng/mlbFGF，20ng/mlEGF的DMEM/F12的培养基中培养， 并稳定传至第三代。用nestin细胞免疫化学染色法鉴定神经干细胞。2.将原代培养的神 经干细胞随机分为3组： 4.9％七氟醚组 （S组），2.8％异氟醚组 （Ⅰ组）和对照组(C 组)。暴露于4.9％七氟醚和2.8％异氟醚中6小时后，继续在培养箱培养12h。 3.增殖 实验：在培养12小时后，加入10μM的EDU，在异氟醚和七氟醚中同时暴露6小时后 进行EDU免疫荧光染色；CellCountingKit-8(CCK-8)2h后检测培养基中的OD值。