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蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis）的PCR检测方法的建立与应用
陈大福 熊翠玲 付中民 李江红 梁勤
（福建农林大学蜂学学院，福州 350002 ）
摘要：蜜蜂白垩病是蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis ）寄生而引起蜜蜂幼虫死亡的真菌性疾
病，为西方蜜蜂（Apis mellifera ）最为严重的病害。本研究利用Ascosphaera 属中 20 个种的
核糖体基因内转录间隔区 ITS1 、ITS2 和 5.8S 区段（ITS1-5.8S-ITS2 ）序列，设计出A. apis
的特异性引物，以A. apis 分离株为模板，建立了检测A. apis 的PCR 方法。结果表明：该方
法仅能从A. apis 分离菌中扩增出 442 bp 的特异性目的片段，而其他参试的蜂群微生物无扩
增条带，该引物最低检测 DNA 模板量为 4 pg 。应用该方法可有效检测出不同蜂群的蜜蜂幼
虫体内的A. apis 。表明本研究所建立的检测方法特异性强、灵敏度高，可用于蜜蜂白垩病的
临床诊断和流行病学调查，对该病的控制有一定的实用意义。
关键词：西方蜜蜂，蜜蜂白垩病，蜜蜂球囊菌，PCR 检测
Establishment and application of PCR assay for detection
of Ascosphaera apis, causative agent for chalkbrood
disease
*
CHEN Da-Fu, XIONG Cui-Ling, FU Zhong-Min, LI Jiang-Hong, LIANG Qin
(College of Bee Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China)
Abstract: Chalkbrood, a fungal disease of honey bee brood caused by Ascosphaera apis , is
currently the most serious disease in Apis mellifera . This work aimed to develop a PCR protocol
for specifical detection A. apis. According to the 5.8s ribosomal DNA and the internal transcribed
spacers (ITS1 and ITS2) sequences in GenBank of 20 fungi in Ascosphaera genus, a pair of
primers for amplying A. apis specifical fragment were designed and synthesized. PCR technique
detecting the DNA of A. apis was constructed. PCR results showed that a 442 bp specifical
fragment could be amplified from all isolates of A. apis that was not amplified from any other
DNA samples tested, and the sensitivity of detection with PCR assay reached to 4 pg A. apis DNA.
基金项目：国家自然科学基金项目）；福建省自然科学基金项目（2011J01068 ）；国家蜂产业技
术体系建设专项资金（CARS-45-KXJ7 ）。
作者简介：陈大福（1973-），男，河南罗山人，副教授，博士，研究方向为蜜蜂病害，Tel ：0591
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