混合斑精子DNA分析的研究进展_任文彦.pdfVIP

2010年1月 辽 宁 警 专 学 报 Jan.2010 第1期 （总第59期） JOURNALOFLIAONINGPOLICEACADEMY No.1（Sum.59） 混合斑精子DNA分析的研究进展 1 1 2 任文彦 ，张 慧 ，薛大忠 （1.中国人民公安大学 研究生部,北京 100038；2.河北北方学院 法医系，河北 张家口 075000） 摘 要:对混合斑的检测分析，一直是法医学特别关注和急需解决的难题之一。文章综述了各种提取和扩展方 法在混合斑检测中的应用进展、分析比较了诸多研究方法，并对混合斑中精子DNA分析的应用前景和结果评价进行了评议。 关键词:混合斑；精子DNA分析；法医学；个人识别；研究进展 中图分类号:D919.2 文献标识码:A 文章编号:1008-5378(2010)01-0086-04 在性犯罪案件中，女性阴道分泌液与精斑的混合 各有特点，在分离精子细胞中起了很大的作用。 斑迹是常见的生物物证检材，对于这类检材，精子的 DNAIQTMsystem是用细胞裂解液裂解细胞，通 个体来源鉴定是案件侦破的关键。但是在很多情况 过磁性硅胶吸附DNA，从细胞中游离出来的DNA分子 下，这类检材的检验条件比较差，并且由于男性精子 被吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等分子不被吸附而 混在大量女性上皮细胞的背景下，采用常规方法对男 留在溶液中。在磁场作用下，磁性颗粒与液体分开， 性物质进行分离检验非常困难，有时即使得到了分型 回收颗粒后，再用洗脱液洗脱吸附的DNA。 结果，也往往表现为各混合组份的分型相互并存，或 DifferexTM系统是promega公司研制的一种新型高 女性成分呈优势扩增的现象，使结果的分析变得很复 效的混合斑分离系统。它利用标准蛋白酶K消化，并 [1](P.185-188) 杂。 笔者现就混合斑中精子DNA的分析提取 结合相差分离与差速离心技术对混合斑中的精子及上 作一综合评述。 皮细胞DNA进行分离提取。 一、对几种提取方法的介绍 PhaselockGel是一种核酸提取惰性凝胶物质，在 [2](P.39-40) （一）差异裂解法 离心过程中聚集在一起，水和有机相之间形成了阻断 通过两步裂解把上皮细胞DNA和精子细胞DNA分 层，有机相和中间的杂质被有效的封闭在阻断层里面 离开来分别检测。在法医物证检验中发现包括唾液、 或下面，通过简单的倾倒或吸液方式吸出全部水相样 皮肤、口腔、阴道细胞大都是上皮细胞，这些上皮细 品，核酸得率和纯度可增加30%，而且完全不会被中 胞与精子细胞的性质不同，精子细胞膜和核膜含有大 间层物质所污染；PLG还避免了与有毒物质直接接 量的硫醇蛋白，含有丰富的二硫键，比其他细胞如阴 触，提高了操作安全性。 道上皮细胞更难打开，需要用特殊的化学试剂二硫苏 （三）激光捕获显微切割 糖醇 （DTT）打开二硫键。其原理主要是利用精子细 激光捕获显微切割是一项在显微镜下从组织切片 胞与上皮细胞外膜特性的不同，先以蛋白酶K和SDS溶 中分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的技术。基 解阴道上皮细胞外膜，将阴道上皮细胞DNA分离出来 本原理是通过一低能红外激光脉冲激活热塑膜——乙 后，离心