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结核分枝杆菌耐药性检验方法的探讨 西安市结核病医院710061许优王勃 结核病自20世纪90年代以来，全球结核病疫情出现“复燃”趋势，在造成全球结核病疫情回 升的原因中，耐药尤其耐多药结核病的流行是最重要的影响因素之一。及时正确诊断是耐多药结 核病控制的关键步骤，是减少现有患者的基础，对控制结核病流行至关重要。 目前，结核分支杆菌耐药检测是诊断耐多药结核病的主要方法，是指导临床用药的主要依 据。然而药敏结果和临床化疗疗效的相关性却总不能令人满意，出现“高耐药率和高治愈率”令 人迷茫的现象。李群报道浙江省初治组中敏感和耐药病例的治疗成功率分别为93．5％和88．3％，复 治组中分别为67．8％和61．20／60，无论初治或复治，各组内敏感和耐药病例治疗成功率的差异均无统 计学意义(PO．05)。罗萍等报告了北京地区初治患者耐药和疗效的关系，敏感和耐1—3中药的 江和广东初始耐多药和获得性耐多药病例治愈率分别为94．3％和63．2％。我们从上述耐药检测报告 中得出一种规律：在敏感和耐药两个方面，初治患者的疗效一般优与复治患者，给人一种药物敏 感或耐药对这样的结果无关紧要的；虽然耐多药疗效降低，但仍存在较高的治愈率，药物敏感或 耐药似乎对疗效无明显影响。这样的现象耐药检测结果并不能做出令人信服解释，使人们不得不 质疑该方法诊断耐多药结核病的准确性及作为改变化疗依据的可靠性。 王璞等报告耐多药肺结核病人痰结核分枝杆菌耐药存在不均一性；Kaplan等发现结核病患者 肺部不同部位存在不同基因型的结核分枝杆菌，屠德华认为常规药敏检测结果报告耐利福平、异 烟肼时并不是所有菌株耐这两种药，有可能存在同时耐利福平、异烟肼菌株，也有可能只是耐利 福平和异烟肼菌株的混合。这些都说明结核病患者体内结核分枝杆菌耐药性可能很复杂，目前耐 药检测方法是否能真正准确反映患者体内结核分枝杆菌耐药状况值得商榷。 微生物学的观点来看，耐药菌株的出现是基因突变的结果，结核分枝杆菌产生耐药菌株是 一种自然现象，各种抗结核药物的耐药菌株存在的频度不一，耐利福平菌株发生率为10一，耐异 烟肼、已胺丁醇、链霉素为10～。结核分枝杆菌的耐药位点在其染色体上，不由质粒携带，因此 耐多药菌株出现的概率为各单独耐药概率的乘积。那么同时耐三种药物的概率为lO～，这在自然 界是不可能存在的。当然，在不规律用药的诱导下，其产生的概率会大大增加，但是解释10．7％的 MDR．TB耐药率还是不能令人信服。 现行的结核分枝杆菌药敏检测方法建立于上世纪60年代，1种或2种药物联合治疗是当时化疗 的主要形式，因此临床耐药界限及其与疗效的关系易于确定。现代化疗方法则是4或5种药物的多 药联合体制，但是药敏检测方法并未相应性改进，所以出现药敏检测结果和预期临床疗效的背离 应该不难理解，所以对目前药敏检测体系进行改进刻不容缓。 、我院目前正在尝试改进现行耐药检测方法，在原来检测结果基础上进行耐药性再检验，使 之能够真实反映患者体内结核分支杆菌的耐药情况，成为个体化化疗用药的准确依据，具体内容 是：选取常规药敏检测报告为耐多药的结核分枝杆菌菌株，将生长在含有INH和含有RFP培养基 上的耐药菌落分别挑出，再培养，然后交叉再行耐药检测，检验该耐药菌株是否真正同时对INH 混合两种。前者为真正耐多药菌株，而后者则应只是单耐药菌株。再此基础上，通过梯次耐药检 验尝试分离出耐HRES的结核分枝杆菌株。 145 当然，该试验是一种探索性的研究，理论上仍有一些值得商榷之处，具体操作程序也有许多 问题，目前还没有正式结果，但是，希望我们的尝试能够起到抛砖引玉的作用，推动结核分枝杆 菌药敏检测方法的改进，使之能够真实反映患者体内结核分支杆菌的耐药情况，成为个体化化疗 用药的准确依据。 应用聚合酶反应一反向斑点杂交法检测利福平 结核分支杆菌rpoB基因突变 530021 广西壮族自治区疾病预防控制中心 刘明团 刘飞鹰 王喜文董柏青 摘要目的应用聚合酶链反应．反向斑点杂交法快速结核菌耐药基因突变，为临床治疗耐药 结核病人提供依据。材料与方法本研究采用28株结核分支杆菌来自广西壮族自治区龙谭医院。 药敏测定采用绝对浓度法，对利福平耐药的标准浓度为大于50ug／ml。结核杆菌RF