大豆铁结合蛋白基因cDNA的克隆序列分析和表达载体的构建.pdfVIP

维普资讯 西 南 农 业 学 捉 2002年 15卷 3期 SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences Vo1．15 No．3 文章编号：1001—4829(2002)03—0028—05 大豆铁结合蛋 白基 因cDNA 的克隆、序列 分析和表达载体 的构建 周志钦 ，方卫国2，李德谋2，成明昊 (1．西南农业大学园艺系，重庆 400716；2．西南农业大学生物技术 中心 ，重庆 400716) 摘 要：根据 已报道 的植物铁 结合 蛋 白基 因的保 守序列设计引物，用 RT．PCR方法，成功地从大豆总 RNA 中扩增 出一大小为 0．771kb的cDNA片断。将该片段克隆到pUCm．T载体上，测序和序列的同源性分析表明该片断与Pmudhon等 (1996)报道的大 豆铁结合蛋 白基因的氨基酸序列同源性达 95％。利用 pUCm—T和 pBI121载体上共 同的xhaI和 SacI双酶切位 点，构建了克 隆片段的植物表达载体pSFKna。该载体含 CaMV35S启动子、NOS终止子和 NPT-II基 因，在遗传转化中可用基 因枪导入受体， 并通过卡那霉素抗性筛选转化子 。 关键词 ：大豆；铁结合蛋白基 因；cDNA克隆；表达载体构建 中图分类号：$336 文献标识码 ：A ThecloningandsequenceanalysisofcDNA fragmentofsoybean ferritin gene andconstruction ofitsexpressionvectorforplanttransformation ZHOU Zhi—qin ，FANG W ei．guo2，LIDe-mou2 ChengMing．hao ， (1．DepartmentofHorticulture，SouthwestAgriculturalUniversity，Chongqing 400716。China；2．CenterofBiotechnology，SouthwestAgricultural University，Chongqing400716，China) Abstract：Specialprimersweredesignedbasedonthesequenceinformationofplantferritingenesreported intheliteraturenadwereused forreversetranosription-polyrnerasechainreaction(RT-PCR)withthetotalRNAofGlycbw7 CV．XidouNo．3asPCRtemplateinna attempttocloneitsferritingene．A singlecDNA fragmentof771bpwassuccessfullyobtainedfrom theRT—PCRsna dwassuccessfully clonde intovectorpUCm．T in thisstudy． esequencehomologynaalysisoftheclonde fragmentshowde thattheddeucde aminoacidsof thefragmenthadninety-fivepercenthomo logytothatofthesoybeanferfitingenereportde byPmudhoneta1．(1996)．Therecombinant