用定量荧光显微镜技术检测细胞内微环境变化.pdfVIP

是手术中快速检诊的又一新方法。 5．2禁忌症及检测中注意事项用做肿瘤检测的组织，应为手术中切取的新鲜标本，体积最小应在1立方 厘米左右，必须由在经验的病理医师来检查取样，不适合钙化骨化标本。禁忌检测样本触及生理盐水和， 或含钠麻醉剂制品，以免影响到测定结果的准确性。对局麻下或局部使用过含麻醉品的标本应予注明，需 用蒸馏水浸泡后再检。 检测结果与病理诊断若不一致，应注意如下情况：可能原因是术中应用了生理盐水，组织表面含有钠 离子成分，影响仪器检测结果；组织表面有血迹污染，未清洗干净；被检测组织温度偏低，探测时间长； 活检组织病变局限，取样部位选择不够准确；另外原因有检测前探头氧化层打磨不够彻底，探头电量不足； 检测时手法操作不当，探头与组织不能有效充分接触；黏液样和液态标本不适合仪器检测；担当术中病理 诊断的医师、技师临床经验欠缺，其他不明原因。 5．3存在问题该检测方法仅能对病变组织的良恶性质快速做出判定，但不能进行准确地病理组织学分类、 分型，对恶性肿瘤也不能进一步区分出来癌与肉瘤。对特异性病原菌感染的组织标本，只能认定为良性病 变。对病变含有骨组织及肿瘤变性坏死，可致仪器误判结果，此时应结合大体所见再行取样检测，不能武 断作出判定。 参考文献 1． 邢传平，刘斌，李宁，等．Na+微电流检测在手术中诊断良恶性病变的应用【J】．西北国防医学杂志．2008，29(4)： 260-262 2． 赵青川，帝振宇，周景师，等．阳离子微电流探测仪在腹部肿瘤术中诊断的应用叨．生物医学工程与临床．2005，9(3)： 140-143． 3． 叶辉李宁周勇等，微电流探测仪术中诊断肿瘤101例田．医疗卫生装备．2006，27(6) 用定量荧光显微镜技术检测细胞内微环境变化 黄晓峰1，尹文lp王文勇2王爽lp李永强lp于华1 (第四军医大学：1基础部中心实验室，2基础部病理学与病理生理学教研室，西安710032) 摘要：吞噬体是一种特化的细胞器。在有害物质如细胞外病原体或细胞内损伤细胞器等被吞入细胞或被细胞内膜性结 构包绕后，即形成由膜包裹的吞噬体。初级溶酶体很快同吞噬体融合形成次级溶酶体，如果此时溶酶体中的底物是从细胞外 摄取的，则称为异噬体，如为细胞内物质，则称自噬体．其中的吞噬物被酶水解。但某些细胞内病原体可通过改变吞噬体的 成熟或进入不同亚细胞组分而逃避吞噬体的杀灭作用，如结核杆菌、麻风杆菌等。微生物的命运最终取决于周围环境的构成。 与溶酶体消化吞噬物质密切相关的是细胞内的pH和活性氧等。但完整细胞内微环境原位测定及定量仍存在很多困难，本文 简述了细胞内pH和活性氧等检测所使用的试剂及主要技术方法。 关键词：溶酶体；荧光探针；pH值；活性氧 个体对抗侵入微生物的最有效的防御是由固有免疫应答和适应性免疫应答共同实现的。固有免疫应答 构成了抗微生物防御第一防线的主要部分， 包括一系列复杂的快速、短暂、高度局限性的事件，可将感 染控制在入侵部位或其附近。中性粒细胞和巨噬细胞是固有免疫应答的关键成分，可将微生物吞入特化的 细胞内空泡(吞噬体)而清除病原体，在吞噬体内以复杂的机制协同杀灭或消化入侵的微生物。生物化学 方法可分析发生在大群细胞的平均反应，但这些测量因为细胞处于不同步状态，因此时间分辨率不够，而 且这些生物化学研究几乎没有空间信息。单个细胞的显微镜检查虽然可避免细胞的非同步问题并可获得空 32 间细节，但目前的大多数形态学研究，包括免疫荧光和免疫电镜研究，只能提供少数具有对应抗体的蛋白 质静态图像。一些小分子物质可能无法检测或被忽略，近年，随着分子探针设计以及采集、分析单细胞发 射荧光的技术发展，已经实现完整细胞进行特定生物参数的非侵入性测量，并具有高度的时空分辨率。 在吞噬和消化吞噬产物的过程中，吞噬体腔的酸化是吞噬细胞(白细胞或巨噬细胞)杀灭微生物的主 要因素。酸化的腔液不仅可直接影响微生物，也能加强杀微生物肽类的杀灭效力并能增强蛋白质水解和活 性氧中间体的转化。几种细胞内病原体通过干扰吞噬体酸化产生的方式而作为它们的生存策略。因此，研 究病原体与宿主的相互作用时，重要的是测定杀病原体环境的pH和活性氧。以下简述细胞内pH和活性 氧的主要检测方法。 1细胞内pH的测定 1．1使用小分子弱碱测定细胞内pH值 当去质子化后，小分子弱碱很容易通过细胞膜并分布于整个细胞。在酸性成分中这些碱的质子化作用 可大大降低排出细胞的能力，导致它们在细胞内的聚集并与跨膜pH梯度成正比。测定细胞器pS的透膜 测，其光谱可发生位移，如吖啶橙可从绿