大肠杆菌可溶性表达人碱性成纤维细胞生长因子的研究.pdfVIP

卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 ’( )! /’ )! 年 月 #$$ % !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-. #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 大肠杆菌可溶性表达人碱性成纤维细胞生长因子的研究 孙晋华 洪 岸 张 玲 孙奋勇 宋照雷 （暨南大学生物工程研究所 广州 72$0# ） 摘 要：包涵体的形成与外源基因在大肠杆菌中的表达量高度相关，在适当的范围内，降低 在表达宿主 （ ） 中的表达，成为实现高可溶性表达的关键。在不改变氨基 ?F8G8 HI#2 J; K(L-M 酸序列的条件下，对 高表达菌株突变重组子起始密码 下游前 个密码子的摇摆 ?F8G8 *5G 碱基进行随机回复突变，共有C 种组合，合成引物NOP 扩增后，克隆至表达载体K;53B，将重 组子转导 （ ） 后， 诱导表达，发现其中 株有较高可溶性和活性的菌株。可 HI#2 J; K(L-M QN5G 2 见部分降低外源蛋白的表达量可以避免与减少包涵体的形成。 关键词：可溶性表达，包涵体，人碱性成纤维细胞生长因子，大肠杆菌，回复突变 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） R44 * $$$230#$4 #$$ $!3$!!%3$7 人碱性成纤维细胞生长因子（ ， ）是一种有丝 S+9@ F9-=B T=FU’F(9-. ,U’V.? T9B.’U ?F8G8 分裂源，对于中胚层与外胚层起源的细胞有广泛的促增殖作用，参与多种病理生理活动， 因而临床上极具应用价值。?F8G8 分子量小且无糖基化问题，适于原核表达，为目前国际 上生产重组?F8G8 蛋白的主要手段。但是，根据文献，国内尚无非融合表达量超过 2$ W ［］ 2 的情况 ，本所以前的工作也证明原始的?F8G8 序列直接构建到原核表达系统中，表达很 低。分析原因，主要是 的翻译起始区（ ， ） 含量高， ?F8G8 5U9@-(9.=’@ Q@=.=9.=’@ P6,=’@ 5QP GO 大肠杆菌的偏好密码子稀少的缘故，本实验室在此方面取得了一定的突破，建立了一套有 ［］ 2 效的方法，获得高效表达的菌株 （本文定义为 号）。但毫无例外的是，在高表达的同 2 时，包涵体的存在成为又一大障碍。虽然?F8G8 蛋白具有肝素亲合域，能够通过肝素亲 合层析方便地解决纯化问题，因此包涵体的存在，增加了纯化和复性的工艺，从而降低了 产量，增加了生产成本。 包涵体的形成与外源基因在大肠杆菌中的过量表达密切相关，不仅是原核生物，酵母 ［］ 或是高等动物细胞也是如此，甚至是内源性蛋白在过高表达的情况下也会发生此现象# 。