银杏性别相关的SRAP标记研究.pptVIP

银杏性别决定的分子标记研究 姓名：朱晓利 学号：M070563 导师：陈 鹏 目录 1.摘要 2.选题背景及研究意义 3.研究内容、研究目标、拟解决问题 4.本研究的特色与创新之处 5.年度研究计划及预期研究成果 6.研究基础 摘要： 性别是植物最为重要的生物性状之一。关于银杏性别鉴定的研究方法，前人做了大量研究，但至今没有一种明确的方法能够准确鉴定出其雌雄株。本实验拟在前人的工作基础上，运用SRAP分子标记技术，找出与银杏性别相关的SRAP分子标记，从而为银杏的性别鉴定提供理论依据，为银杏的苗木育种及栽培品种的选育提供方便。 2. 研究内容、研究目标及拟解决的问题 2.1 研究内容 1)调查银杏雌雄株间的植物学性状及物候期差异 2)对供试的银杏雌雄株进行SRAP分子标记分析 3)对银杏雌雄株的染色体进行制片观察其核型 并进行分析 2.2 研究目标1）获得与银杏性别相关的分子标记，从分子水平快速、准确的鉴定银杏雌雄株2）观察银杏雌雄株的染色体的差异以及染色体中随体的数目及分布 2.3 拟解决的关键问题 1) SRAP--PCR的扩增体系、程序的确定及引物的筛选 2) 性别相关标记的克隆及检测分析 3) 检测银杏雌雄株染色体间的差异及染色体中随体的数目、分布情况 3. 拟采取的方案及可行性分析 3.1研究方案 1) 银杏染色体核型观察的研究方案 * * 选题背景及研究意义 在植物的生活史中, 性别决定是一个重要的发育过程，在不同植物中存在很大差异。由于同一树种、不同性别的植物在形态学及生物学特性、经济价值等方面存在一定的差距,林业生产、园林事业中需要根据经营目的与利用方向从而选择栽培某一种性别的植物以满足需求。 对于大多数雌雄异株的果树来说, 童期长、性别分化和性别表现迟缓都会给果树早期性别鉴定带来很大困难。国内外学者主要从外部形态、生理生化差异、化学药剂处理、同工酶图谱、特异蛋白、染色体组型、核酸等方面探索。 银杏为雌雄异株植物, 鲜有雌雄同株，实生树定植后需20～25 年才能开花结果, 分出雌雄植株。在园林绿化工程中，由于银杏种子在成熟后外种皮具有一种特殊的臭味, 落果腐烂污染城市及行人, 因此，银杏作为绿化树种只需雄株, 不需要以生产白果为目的的雌株；在银杏核用园中，则需要种植较多的雌株，同时配置一定比例的雄株以保证授粉质量和产量。所以, 运用SRAP标记得到性别相关的基因，对银杏雌雄株性别的早期鉴别不仅具有理论意义, 而且具有重要的实用价值和经济价值。 采样 预处理 固定 解离 染色 分色软化 压片 镜检 采样 DNA提取及检测 雌雄DNA池构建 SRAP-PCR扩增 电泳检测扩增产物 差异条带的回收及克隆 克隆基因DNA测序 基因序列的Blaster分析 2) SRAP分子标记的研究方案 以银杏的幼小花药、叶、胚珠、小孢子、以及雌配子体游离核为材料,主要采用放线菌酮(Cycloheximide , 100 mg/ kg) 作预处理药物,做常规制片均获得优良的染色体标本进行染色体观察。 3.2 研究方法 1)染色体观察的研究方法 2) SRAP 分子标记的研究方法 SRAP-PCR 扩增体系为（25ul） 模板DNA 2.0ul PCR Buffer (Mg2+) 2.5ul Taq 酶 0.3ul d NTP 0.5ul 上引物 2.0ul 下引物 2.0ul ddH2O 15.7ul SRAP-PCR 的扩增程序为： 95℃预变性4 min， 前5 个循环为94℃变性45 s, 35℃复性45 s, 72℃延伸1 min , 后35个循环将复性温度升为46℃，最后72℃延伸5 min。 3.3 可行性分析 要完成上述实验，关键在于进行SRAP-PCR 扩增体系的优化、SRAP 引物的筛选及性别相关条带的克隆；染色体的制片；具有实验所需的仪器和试剂，实验人员掌握实验的原理及方法，具有较强的实验动手能力。 本实验是在江苏省植物基因组重点实验室进行，具备实验所需的各种仪器和试剂，实验者也通过培训具有基本的实验操作能力。因此，通过努力，研究目标能够预期实