Rac1基因真核表达质粒的构建及其对结肠癌细胞生物学功能的影响.pdfVIP

中华普通外科学文献 (电子版)2014年 6月第8卷第3期ChinArchGenSurg(ElectronicEdition)，June2014，Vo1．8，No．3 · 论 著 · Racl基因真核表达质粒的构建及其对 结肠癌细胞生物学功能的影响 叶志强 陈怡 陈亚琼 刘波 【摘要】 目的 应用分子生物学技术构建Rac1基因真核表达质粒及小分子RNA(siRNA) 干扰片段，通过调控其表达，研究Rae1蛋白对结肠癌细胞生物学功能的影响。方法 从结肠癌细 胞中扩增Rac1基因，构建pCDNA3．1(+)一Racl和pEGFP—Rac1真核表达质粒实现过表达Rac1基因； 通过小分子RNA干扰抑制Racl基因表达。利用侵袭实验 、划痕实验研究Rac1基因对结肠癌细胞 侵袭和迁移能力的改变；通过Pull—Down实验 ，研究调控 Racl表达对癌细胞中GTPase活性的影响。 结果 成功构建Racl基因真核表达质粒。通过调控Racl蛋白的表达证实其与结肠癌细胞中RacI GTPase的活化程度 ，以及肿瘤细胞的迁移和侵袭能力呈正性关联。结论 通过抑制Rac1的表达， 可以有效阻止Rac1GTPase的激活 ，从而抑制肿瘤细胞的迁移及侵袭 ，为抑制结肠癌进展提供新的 干预靶点，也为进一步免疫生物过继治疗提供了必要的实验基础。 【关键词】 结肠癌；Rac1基因；真核表达质粒；GTPase ConstructionofeukaryoticexpressionplasmidforRaclgeneanditseffectonthebiologicalfunction ofcoloncancercellsYeZhiqiang*,ChenYi，ChenYaqiong，LiuBo．*DepartmentofEmergency，the ThirdAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity，Guangzhou510630，China Correspondingauthor：LiuBo，DepartmentofGeneralSurgery，LuogangBranch，theThirdAffiliated HospitalofSunrat-senUniversity,Guangzhou510630，China，Email163．COrn 【Abstract】 objective TorevealtheroleofRaclgeneregulatingcoloncancercellinvasion andmigration．M ethods Rac1genewasamplifiedfrom coloncancercells，andthenconstructedto pCDNA3．1(+)一Rae1andpEGFP—Rac1eukaryoticexpressionplasmidforoverexpressedRac1protein． Meanwhile，siRNAwasusedtoinhibitRae1geneexpression．AftertransfectingRac1-plasmidorsiRNAinto cells，Matrigelinvasion，woundhealingandPull—downassayswereperformedtoinvestigatethealteration ofinvasion，migrationandRac1GTPaseactivityincoloncancercells，respectively．Results A eukaryotic expressionplasmidcontainingRac1genewassuccessfullyconstructed．Upordown—regulati0nofRac1 expressioncouldstimulateorblockGTPaseactivation，andRac1genehadtheabilitytomodulatethemigration andinvasionofcoloncancerceils．Conclusions OurstudyprovidesapotentialtargetthatgeneRac1playsthe synergisticrolewithconventionaltherapyincoloncancerbysuppress