抗体重链可变区框架Ⅰ区对抗体分泌的影响.pdfVIP

第24卷第3期 病 毒 学 报 V01．24No．3 1 1 1 1堡!星 呈望!些圣量曼』坌坚塞些垒兰竺至兰!垦!!兰皇鱼兰 坠!￥ !!!! 抗体重链可变区框架I区对抗体分泌的影响 朱莉莉，李川1，李建东，孙丽娜，梁米芳，李德新 (中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室，北京100052) 摘要：抗体重链可变区框架I区(FR—I)对抗体在原核细胞中的分泌表达具有显著的影响，单个氨基酸的改变即可导 致抗体分子分泌能力的丧失。为了探索抗体在哺乳动物细胞中的高效表达，我们对一株不能有效分泌的人源抗狂 H6位的氨基酸由Glu突变为Gln之后，抗体的分泌表达水平得到了显著的提高，并且与抗原特异性结合的能力也 明显增强。通过免疫荧光法对抗体在细胞内的转运过程进行了初步的探讨，发现能够有效分泌的抗体与无分泌表 达的抗体都能够在细胞内进行正常的转录和翻译，进入内质网并转运至高尔基体，而且胞内表达水平基本一致。 我们认为分泌能力的不同可能是FR-I区影响抗体分子的折叠与装配所致，其中该区H6位氨基酸的性质能够显著 影响抗体在哺乳动物细胞中的分泌。本研究以抗体重链可变区FR—I区氨基酸为焦点，对基因工程抗体在真核细 胞中高效表达的影响因素进行了探索，为改进抗体规模化生产提供了依据。 关键词：抗体可变区；氨基酸突变；真核表达 中图分类号：R373．9Q78 文献标识码：A 文章编号：1000-8721(2008)03—0172—06 抗体分子具有4条多肽链的对称结构，由两条 分泌和产量[3]。由于真核表达系统具有翻泽后修饰 相同的重链和两条相同的轻链组成。重链和轻链之 功能，因此原核与真核细胞的分泌表达机制具有很 间及重链和重链之间通过二硫键共价结合形成异源 大的差别。分泌表达能力可直接影响抗体在真核细 胞表达生产过程中生产的规模、成本。为了探索基 四聚体结构。轻链和重链都可分为可变区(Varia— ble 因工程抗体在真核细胞中的高效表达，本研究利用 region，V)和恒定区(Constantregion，C)，抗原 结合部位主要由可变区构成。可变区由高变区或称 基因定点突变技术对本实验室分离的一株在真核细 re- 胞不能有效分泌表达的抗狂犬病病毒抗体重链可变 决定簇互补区域(Complementarity-dertemining 区FR-1区的氨基酸进行替换，改变原有的氨基酸 gions，CDRs)和框架区(Frameworkregions，FRs) 两部分组成。高变区形成抗原结合位点，而4个框 组成，获得系列带有不同FR一1区的抗体重链基因 架区形成由2个反相平行的Bsheet组成的桶状结表达质粒，除了FR-1氨基酸编码基因外其他部分 构，这在三级结构上就是免疫球蛋白的折叠。框架 基因组成完全相同，分别与轻链基因表达质粒pC— 区不仅在整个抗体分子结构的形成中具有重要的作 MV—RV／VL进行共转染表达，探索FR一1区对抗体 用，而且对抗体分子的某些特性例如亲和力等也具 在真核细胞内表达水平的影响。这一研究为基因工 程抗体的高效表达提供了一定的参考依据。 有一定的影响。但是，一般认为框架区的氨基酸对 于抗体亲和力的影响作用是间接的，它可以通过影 响CDRs结构或整个抗体分子的正确折叠D-z]来发 材料与方法 挥作用。FR一1区位于抗体折叠的核心区域，它对于 1材料来源及试剂 抗体重链基因哺乳动物表达载体pC— 抗体分子的折叠及稳定性具有更为重要的作用，单