动物细胞培养的准备.ppt

第三章细胞培养的准备工作 玻璃器皿 金属器械 橡胶 塑料制品 玻璃器皿的清洗 浸泡（自来水）→ 刷洗（洗衣粉） →酸泡（24小时） →自来水冲洗→蒸溜水浸泡和冲洗→ 50℃烘干 橡胶、塑料制品的清洗 清水清洗→浸于自来水过夜→用纱布或棉签和50℃稀洗液刷洗→流水冲洗（15－20遍） →晾干→浸于清洁液15分钟→流水冲洗（15－20遍） →蒸馏水浸洗三次，三蒸水泡24小时→晾干或50℃烘干备用。 金属器械的清洗 放到含洗涤剂的水中反复刷洗后→自来水反复冲洗干净→晾干→用75％酒精擦拭→自来水反复冲洗干净→最后三蒸水浸洗3次，晾干或50℃烘干备用。 正压除菌滤器的清洗 含稀洗涤剂的水中，反复刷洗后→流水冲洗15min →漓水→蒸馏水浸泡24h →三蒸水浸泡24h →晾干或50℃烘干备用。 塑料器材 常用的塑料器材有多孔培养板（4孔、6孔、12孔、24孔、96孔）、培养皿、培养瓶及吸头。 重复使用的处理步骤： 自来水刷洗 3％HCl或2％NaOH溶液浸泡过夜 自来水充分冲洗 双蒸水冲洗3次 紫外线直接照射或辐照灭菌 清洗时应注意： 浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。 冲洗时要流水振荡冲洗，方法是：每瓶灌2/3容积的自来水，振荡后倒掉，重复15-20次。 煮沸前水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂 配制时先在容器中加入蒸馏水，加热溶解重铬酸钾， 再将容器置流动自来水中，待重铬酸钾液冷却后， 缓慢加入浓硫酸，边加边搅拌。 包装材料：牛皮纸 硫酸纸 铝箔 纱布 金属消毒桶 铝质饭盒 方式：全包装 局部包装 包装时应注意：手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材的使用端；封闭器材使用端，标记器材手持端；小包装；玻璃管道口（尖吸管、移液管手持端等）加棉花。 消毒灭菌方法 清除或杀灭物品 上的一切微生物, 以杀灭芽孢为准 物理法1：紫外线消毒 紫外线直接照射消毒是各实验室常用的方法； 主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒。 紫外线消毒时产生臭氧，对身体有害，故紫外线消毒停止后30分钟才可入室工作。 目前有的实验室采用电子灭菌灯代替紫外灯进行空气消毒。 紫外线消毒法是利用紫外线照射，使菌体蛋白发生光解、变性，菌体内的核酸、酶遭到破坏而死亡的一种消毒方法。紫外线的杀菌力与其波长密切相关，最佳杀菌波长为250-270nm. 光照消毒法主要利用紫外线照射，使菌体蛋白发生光解变性而导致细菌死亡，常用方法有： 日光曝晒消毒法 日光曝晒法用于枕头、床褥、床垫、棉絮等的消毒，一般曝晒6 h可达到消毒，曝晒时2 h翻面一次 紫外线消毒法 紫外线消毒法用于空气消毒与物品表面的消毒 物理法2：干热消毒 干热是指相对湿度在20%以下的高热，由空气导热，传热 较慢，干热消毒灭菌常用的方法; 1.焚烧灭菌法; 2.燃烧灭菌法; 3.干烤消毒灭菌法:用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品，如油剂、粉剂、玻璃器具、金属制品等; 玻璃器皿，160oC 90-240mins 4.微波消毒灭菌法:①用于食品及餐具的消毒 ②医疗药品及耐热非金属材料物品的消毒灭菌 物理法3：滤过消毒 目前细胞培养工作中采用的培养用液，包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌 。 滤膜使用时应注意：滤膜薄且光滑，容易移动，安装时膜位置一定要放正。过分干燥的滤膜很脆，在高压或高温干燥时易破裂，因此安装前可先用三蒸水润湿滤膜。为保证过滤效果，在使用时，每次垫两张滤膜，上面一张孔径为0．45微米，下面一张孔径为0．22微米，或两张均为0．22微米。使用无齿玻片镊子夹取滤膜，以防止镊齿弄破滤膜。加大压力时用力应均匀，用后打开滤器对光检查滤膜是否移动和有无破裂。 物理法4： 湿热灭菌 湿热由空气和水蒸气导热，传热快，穿透力强，湿热消毒灭菌常用的方法： 煮沸消毒法 高压蒸汽灭菌法，一般高压蒸汽灭菌的压力为102. 97-137.30 kPa，温度为121～1260C．经15-30 min可达到灭菌目的 最常用、最有效的方法； 布、金属、橡胶、玻璃、某些培养液 培养液，橡胶：10磅（115oC）20mins；