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第一部分 肉与肉制品化学指标测定实验 实验七 肉与肉制品中聚磷酸盐含量的测定 一、薄层分析法 （一）测定原理 用三氯乙酸提取肉和肉制品的聚磷酸盐、提取液经乙醇、乙醚处理后，用微晶纤维素薄层层析板分离，通过喷雾显色检验聚磷酸盐。 （二）仪器和材料 实验室常规仪器。绞肉机，孔径不超过4mm。实验室用匀浆器。涂0.25mm厚板的涂布器。玻璃板：10×20cm**2，5×20cm**2。层析缸。微量注射器。吹风机：有冷、热风挡。喷雾器。 （三）试剂 所用试剂均为分析纯，所用水为蒸馏水或相当纯度的水。 三氯乙酸。乙醚。95％乙醇。薄层板：用薄层用的微晶纤维素制备，或同样的预制板。可溶性淀粉。 标准参比混合液 在100mL水中溶解下列物质：磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）200mg，焦磷酸四钠（Na4P2O7·10H2O）300mg，三磷酸五钠（Na5P3O10）200mg，六偏磷酸钠(NaPO3) x（x＞10）200mg。 展开剂 将异丙醇140mL，浓度为135g/L的三氯乙酸，水溶液40mL，氢氧化铵， 0.6mL混合均匀，放入密闭瓶中。 显色剂Ⅰ 将同体积的浓硝酸与浓度为75g/L的四水钼酸铵溶液混合，在100mL 上述溶液中溶解酒石酸10g（现用现配）。 显色剂Ⅱ 在浓度为150g/ L焦亚硫酸钠溶液195mL与浓度为200g/L的亚硫酸钠溶液5mL的混合液中溶解1-氨基-2-萘-4-磺酸0.5g，再在此溶液中溶解结晶乙酸钠40g。溶液贮于密闭的棕色瓶中，于冰箱保存，可存放一周。 （四）操作方法与步骤 1．取样 至少取有代表性的试样200g，于绞肉机中至少绞两次使其均质化并混匀，贮于密闭容器中备用。 尽快分析试样，不得超过5h。 2．薄层板的制备 将可溶性淀粉0.3g溶解在90mL沸水中，冷却后加入微晶纤维素粉15g，用匀浆器均化1min。用涂布器把浆液涂在玻璃板上，铺成0.25mm厚的浆层，在室温下自然干燥1h，再在100℃烘箱中加热10min，取出立即放入干燥器中。也可以用予制的微晶纤维素板。 3．提取聚磷酸盐 将40～60℃的水15mL倒入装有50g试样的烧杯中，搅拌，不超过5min。加入三氯乙酸10g，1h后，，，，，1min，，，5～10mm，，30min。用微量注射器取提取液3μL，6μL，2cm处的师薄层板上， ，3μL点在同一块板上，1～1.5cm，，，，10cm处，，10min（可在室温下干燥30min或用吹风机冷风档吹干）。 5．碳酸盐的检验 展开过的薄层板立在通风橱中，Ⅰ均匀地喷到板上，，100℃烘箱至少烘1h，，，Ⅱ，Ⅱ，Rf值见下表 名 称 正磷酸盐 焦磷酸盐 三聚磷酸盐 六偏磷酸盐 Rf 0.70～0.80 0.35～0.50 0.20～0.30 0 一般在肉和肉制品中提取磷酸盐的Rf值偏低。 注：可用鲜肉的提取液校正磷酸盐的Rf值，coors4号）（布氏漏斗）； ② 玻璃纤维滤纸（圆周2.4cm）； 将备有玻璃纤维滤纸的古氏坩锅装在抽滤装置上，把滤纸放在板中央，并用50mL左右水洗涤，在通风烘箱内于125℃下干燥古氏坩锅30min，然后移入干燥器内冷却称重。 ③ 坩锅； ④ 烘箱； ⑤ 茂福炉； ⑥ 500mL烧杯； ⑦ 100mL量桶； ⑧ 抽滤装置； ⑨ 干燥器。 （三）试剂 ① 稀硝酸，加1体积浓硝酸于4体积水中。 ② 喹铝柠酮试剂：在150mL水中溶解70g二水合铝酸钠，在85mL硝酸和150mL水的混合液中溶解60g柠檬酸并冷却，边搅拌边缓缓将铝酸钠溶液倒入柠檬酸——硝酸溶液中，溶解5mL合成喹啉于35mL浓硝酸和100mL的混合液中，不时搅拌，并缓缓将其加到锃酸一硝酸溶液中，混合均匀，放置24小时后过滤，向滤液中加280mL丙酮，并用水稀释至1升，混合，存于无色的聚乙稀瓶中或深棕色玻璃瓶中。 （四）实验步骤 ① 准确称取2.5g样品（样品中P2O5的含量不超过25mg），不用于灰化的坩锅中，并在通风烘箱内于125℃下干燥30min，在550℃下灰化至成为白色或接近白色为止。 ② 冷却，向灰化坩锅中加入25mL稀硝酸，在蒸汽浴中加热30min，过滤，收集滤液于400mL烧杯中，用蒸馏水清洗灰化坩锅和滤纸，使烧杯内收集的滤液总体积为100mL左右。 从这一步开始要用25mL稀硝酸和75mL蒸馏水做一试剂空白平行试验。加50mL喹铝柠酮试剂于盛滤液的烧杯中，盖上表面皿并煮沸1min（不要用明火）。悉心搅拌，冷却至室温。 ③ 将沉淀移入与抽滤装置相连的古氏坩锅内，并分别用25mL蒸馏水洗涤5次，每次洗涤水彻底排干后，再加下一部分水洗。 ④ 在125℃下使古氏坩锅和锅内收集物干燥30min，移入干燥器中冷却，称重。 （五）计算： 磷含量（%）=