口蹄疫病毒RT—LAMP检测方法的建立.pdfVIP

维普资讯 第 30卷 第 5期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30．No．5 2008年 5 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine May 2008 口蹄疫病毒 RT—LAMP检测方法的建立 秦智锋 1,2，曾少灵 ，阮周曦 ，陈 兵 ，曾琛福 ，花群义 ， 吕建强 ，叶奕优 ，范万红 ，毕英佐 (1．深圳出入境检验检疫局 ，广东 深圳 518045；2．华南农业大学 动物科学学院，广东 广州 518642) 摘 要：为了建立检测 口蹄疫的快速实用分子生物学技术，本研究借助新兴的环介导等温扩增技术，建立了 一 种灵敏 、特异、快速的分子生物学检测方法 ．体外等温扩增检测方法。设计 了6条针对 FMDV3D基 因的8个 位点的特异性引物 ，建立了一套从核酸抽提到检测仅需要 75min的快速检测技术 。所建立的检测方法灵敏 ，与 实时荧光 RT-PCR灵敏度相-3；且具有特异性，对其他水泡性疾病痛原体检测均为阴性；而且简单，不需要复杂 的仪器，常规水浴锅在 63．5℃即可进行，肉眼可直接观察检测结果。该方法是适合基层和现场检测而无需送至 中心实验室的快速灵敏实用的分子生物学检测方法。 关键词：口蹄疫病毒；环介导等温扩增技术 中图分类号 ：Q784；$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2008)05．0375．04 DevelopmentofanovelRT-LAMPassay fOrfOot．and．mouthdiseasevirus QtN Zhi-feng ，ZENGShao-ling，RUANZhou—xi，CHENGBing，CAOCheng-fu， HUAQun-yi，LVJian-qiang，YEYi—you，FANWan-hong，BIYing-ZUO’ (1．ShenzhenEntry-ExitInspectionandQuarnatineBureau，Shenzhen518045，China；2．CollegeofAnimalScience SouthChinaAgriculturalUniversity，Gunagzhou510642，China) Abstract：Inordertodeveloparapidandsimpletechnologyfordiagnosisoffoot—and—mouthdiseasevirus(FMDV)，anovel speedRT-LAMPassayofrFMDV wasexploredwithLoop—mediatedamplification(LAMP)．3pairsofprimers toidentify8 positionsin3D geneweredesigned．A RT-LAMPassaywasdevelopedofrtherapiddetectionofFMDV ．Theprocessofassaywas conductedwithonestepamplificationat63．5℃ inasingletubewithin75minutesandhteamplificationresultswasvisualizedby addingSYBR．Th esensitivity ofRT—LAMP assaywasequivalenttotherealtimeRT-PCR andnoamplificationwasofundwith thesamplesofSVDV，PRRSV，SVDV ．Therefore，therapidandsimpleassayisapotentialusefultechn iqueofrFMDV detection infieldconditions． KeyWOrds：food—and—mouht disease；RT-LAMP *Correspondingauht