12S rRNA和Cytb基因序列测定在獐乳制品鉴定中的应用.pdfVIP

四川动物 2008年 第27卷 第6期 SichuanJournalofZoology Vo1．27 No．6 2008 12SrRNA和 Cytb基因序列测定在獐乳制品鉴定中的应用 黄娅琳 (国家林业局野生动植物刑事物证鉴定 中心，南京 210046) 摘要：采用改良的蛋白酶K消化和酚／氯仿抽提的方法从脂肪含量很高的动物乳制品及胃组织中提取出基因 组总DNA，利用特异引物扩增了线粒体 12SrRNA基因和Cytb基因的部分片段，测定了12SrRNA和Cytb基因的 PCR扩增产物序列 ，使用BLAST搜索软件将其序列与GenBank中的同源序列进行 比对，并利用DNAMAN分析软件 分析序列同源性。结果表明3件检材均来源于獐 Hydropotesinermis。本研究所用方法在野生动物乳制品鉴定中具 有较高的应用价值。 关键词 ：12SrRNA；野生动物 ；乳制品；种属鉴定 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000—7083(2008)06—1111—04 ApplicationofSequencing12SrRNA andCytbGenetoIdentificationofDairyProductsof Hydropotesinermis HUANG Ya．1in (WildlifeMaterialEvidenceAppraisalCenteroftheStateForestryAdministration，Nanjing210046，China) Abstract：A modifiedmethodO DNA extractionwasappliedtoextractDNA from animaldairyproductsandstomachtis— sue，whichcontaininghighfat．Polymerasechainreaction(PCR)assayswereperformedusingspecificprimerstoapartof mitoehondrial12SrRNA geneandCytbgene．ThePCR productsofmitochondrial12SrRNA geneandCytbgenewerese— quenced．Andtheobtainedsequenceswerealignedwithhomologoussequeneesderivedfrom GenBankbyBLASTandDNA— MAN software．Theresultsindicatedthatallofthesampleswerederivedrfom Hydropotes nermis．Thisstudyprovidsagood examplefortheidentificationofanimaldairy products． Keywords：12SrRNA ；Cytbgene；wildanimal；dairyproduct；speciesidentification 近年来，受经济利益驱使 ，非法收购、运输、出 本研究使用改 良的蛋 白酶 K消化和酚／氯仿抽 售、走私珍贵濒危野生动物及其制品的案件 日趋增 提的方法，从脂肪含量很高的动物乳制品及 胃组织 多。在许多案件中，由于野生动物样品已经腐烂变 中提取出了基因组总DNA，并用PCR产物直接测序 质或被高度加工，利用普通的形态学鉴定方法很难 技术对这些检材进行鉴定。 鉴定。随着分子生物学技术的发展，DNA分子标记 1 材料与方法 技术 已越来越多地应用于动物种类的识别 (刘 中权 等，1999；王义权等，1999；刘向华等，2001；亏开兴 1．1 材料 等，2002；黄娅琳，2005；黄娅琳等，2006)，并在案件