HBV／HEV融合抗原大肠杆菌表达包涵体的变复性和纯化.pdfVIP

第31卷第4期 长春理工大学学报 (自然科学版) V01．3l No．4 2008年12月 JournalofChangchunUniversityofScienceandTechnology(NaturalScienceEdition) Dec．2008 HBV ／HEV融合抗原大肠杆菌表达 包涵体的变复性和纯化 刘葳，马德章，于航，李冰，于源华 (长春理工大学 生命科学技术学院，长春 130022) 摘 要：利用乙型肝炎病毒 adr型的s抗原基因和戊型肝炎病毒China-D型的ORF2编码区的羧基末端中的部分序 列构建融合抗原表达栽体，在大肠杆菌中表达时，出现了大量包涵体，我们对包涵体进行洗涤，变性，复性，金属 亲和层析柱和凝胶过滤纯化后，蛋白的相对含量达98％。采用Westernblot对 目的蛋白活性进行检测，具有乙肝和 戊型肝抗原活性。为提高资源利用效率，降低威本，提高产量，以及进一步研发疫苗用抗原提供了实验基础。 关键词：HBV／HEV融合抗原； 包涵体；变性；复性；纯化 中图分类号：Q789 文献标识码：A 文章编号：1672—9870(2008)04—0007—05 Denaturation，RenaturationandPurificationofInclusionBodies ofHBV ／HEV fusionAntigenExpressedInE．coli LIUWei，MA Dezhang，YUHang，LIBing，YUYuanhua (SchoolofZfieScience，ChangchunUniversityofScienceandTechnology，Changchun130022) Abstract：W hentheHBV／HEV fusionantigenexpressionvectorconstructedbySgeneofadrsubtypeofHBV nadsomese- quenceslocatedinC-terminalinORF2encoderegionofchina-D subtypeofHEV wasexpressedinE．coli， alargemaaountof inclusionbodiesemergedW．estudyonclenanig；denaturation；renaturationofhteinclusionbodiesandpurificationthrou曲 Nicolumnaffniitychromatographyna dgelfiltration．Theresultindicatedhtat， hterelativecontentoftheproteniofis98％， nadtheproteinhaveallantigenactivityofHBV nadHEVthroughWesternblotassay．TheresultofthestudyCna beusedtOim— provetheefficiencyofresourceuse， reducecosts， increaseoutput， aswellasfurtherdevelopmentofvaccineantigens． Keywords：HBV／HEV fusionAntigen； inclusionbody； denaturation； renaturation； purification 乙型肝炎感染是影响人类健康的一种严重的传 (DE3)中表达出成本低廉的融合抗原蛋白，为肝 染病。在中国仅乙肝病毒携带者就达 10％，在南方 炎的交叉感染提供了一个新的预防途径。 某些地区甚至高达 17％，20％的HBV长期携带者 包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集形成 还会发展为肝硬化和肝癌。戊型肝炎在中国的西部