My027融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌的表达.pdfVIP

上海医学 2008 年第 3 1 卷第 10 期 ·739 · ·论著 · My027 融 合 蛋 白 表 达 载 体 构 建 及 其 在 大 肠 杆 菌 的 表 达 李晓华 　郑升 　刘优萍 　骆天红 　罗敏 　　【摘要】　目的 　探索 My02 7 蛋 白的体外表达 ,通过原核表达获得大量可溶性 My027 融合蛋白。方法 　逆 ( ) 转录2聚合酶链反应 R T2PCR 法扩增出 My027 片段 ,插入原核表达 载体 p GEX24 T22 ,构建质粒 p GEX2My027 。 ( ) 转化 BL221 菌 ,IP T G 低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法 获得 融合 蛋白,采用十二烷基硫酸钠 SDS 2聚丙烯酰 胺凝胶 ( PA GE) 、We st e rn 印迹 法及质谱进 行鉴定 。结果 　融合 蛋白以水溶形式分泌于大肠 杆菌 BL221 胞质 中 ,纯化后的目的蛋白经 SD S2PA GE 、We st er n 印迹 法及质谱证实高效表达 ,氨基酸序 列正确 。结论 　人脂肪 细胞新蛋白 My027 在 p GEX24 T22 原核表达载体可获高效表达 ,为进一步研究其功能奠 定基础 。 【关键词】　蛋白 My027 ; 融合蛋白; 原核表达 C n str uct i n f rec mb inat i n vect r har b r in g My027 f u si n pr t ein an d it s expr essi n in E. c l i 　L I Xi a h ua , Z H E N G S hen g , L I U Y u pi n g , L UO T i an h n g , L UO M in . Sh an g h ai I nst it ut e f E n d cr ine an d Met ab l i c D i sease , Dep ar t men t f En d c rin l g y a n d M et ab l i sm D is ease , Ruij in H s pit a l , S ha n g ha i J i a t n g U ni ver2 s it y Sch l f M ed i cine , S ha n g ha i 200025 , Chin a C r resp n d in g au t h r : L U O M in , E2m a i l : x uy a nr r @y a h . c m. cn 　　【Abstra ct 】　Object ive 　T in vestig at e the exp ressi n f fu si n p r tein My027 in vit r an d t bt ain a bu n2 da nt s luble f u si n p r t ein My027 by euk ar y t ic exp ressi n . Meth ds 　The f ull len gth My027 cDNA wa s ampli2 f ied b y r ever se tran sc rip t ase p ly me rase ch ain react i n (R