虫草肾茶胶囊对肾小球硬化模型大鼠ECM积聚影响.pdfVIP

虫草肾茶胶囊对肾小球硬化模型大鼠ECM积聚的影响 宋立群于思明马晓鹏 (黑龙江中医药大学第一附属医院) 【摘要】目的观察虫草肾茶胶囊对肾小球硬化早期模型大鼠ECM积聚的影响，探讨虫草肾茶 胶囊的作用机制。方法将72只大鼠随机分为假手术组(12只)、模型组(20只)、虫草。肾茶治疗组 (20只)、福辛普利对照组(20只)，采用单侧肾切除并阿霉素尾静脉注射法建立肾小球硬化早期大 鼠模型。虫草肾茶治疗组给予虫草肾茶胶囊(0．479·kg-1．d’1)灌胃，福辛普利对照组给予福辛普利 化。连续给药12w后处死大鼠，观察肾脏组织形态学改变，用免疫组织化学方法检测肾组织CTGF、 的硬化，呈局灶节段性分布，间质可见明显纤维化和局灶性炎细胞浸润。与模型组比较，治疗组与 加MMP．2的表达，起到延缓肾小球硬化早期进展的作用。 肾小球硬化(GS)是多种生物活性物质、多种细胞成分参与的复杂过程，肾脏局部和机体系统 的环境都可以影响其发生发展， 它以细胞外基质(ECM)积聚和系膜细胞增殖为病理特征。ECM 积聚是导致GS的重要因素，而ECM的生成增多和(或)降解减少是ECM积聚的主要原因。本研究以 阿霉素肾小球硬化模型大鼠为研究对象，观察了虫草肾茶胶囊对。肾小球硬化早期模型大鼠ECM积聚 的影响。 材料与方法 l实验材料 1．2药物与仪器虫草肾茶胶囊由发酵冬虫夏草菌粉、猫须草(别名’肾茶)、制大黄、草豆蔻等6 味药物组成，每粒胶囊重0．459，相当于生药2．419。发酵冬虫夏草菌粉由江西金水宝制药有限公司提 影显微镜(BI，Motic)、DNP．9162型电热恒温培养箱(上海)。 2实验方法 ·2．1动物分组与造模方法实验动物适应性饲养1w后，随机分为假手术组(A组)12只，模型组 模型制作方法进行。除假手术组外，其余60只大鼠，以1．5％戊巴比妥钠50mg／kg腹腔注射麻醉，将 大鼠呈俯卧位固定于操作台上，术区剃毛，常规消毒。沿左侧肋弓下行背部切口l～1．5cm，轻轻牵 引肾周脂肪组织，将左肾暴露于切口之外，剥离肾脏脂肪及肾上腺，结扎左肾门血管，切除左肾。 假手术组大鼠以同样方法麻醉，背部切口，暴露左肾，剥离肾脏脂肪包膜，但不切除肾脏。术后第 8d B组、C组、D组大鼠尾静脉注射ADR 3mg／kg，第35d尾静脉注射ADR2mg／kg。A组大鼠同样于术 后第8d、第35d尾静脉注射等量生理盐水。 3检测指标及方法 谢笼中，留取24h尿液，测尿量，尿标本离心后测24h尿蛋白定量，采用焦榈酚红．钼酸盐显色法。 正中切ISl，钝性分离腹主动脉并采血，分离血清，用于生化指标检测。 3．3肾脏病理学改变于第12w末大鼠腹主动脉采血后，灌注4℃预冷生理盐水约200ml，同时开 放大静脉反复灌洗肾脏至其外观发白，迅速取出右肾，剥离肾包膜，自肾门处切成两片，以10％多 聚甲醛固定，留待检测。 3．4免疫组化检测 温条件下完成，按试剂盒说明进行操作。结果在高倍镜(×200)下随机选择20个不重复的肾小球和肾 小管-间质视野，根据染色面积和强度按下列方法进行半定量评分。染色强度标准：基本不着色者0 分，着色淡者1分，适中者2分，深者3分。染色面积标准：无染色或微弱染色者0分，染色面积25％ 将染色强度与染色面积得分相加，总得分0为0，总得分1～2为l，总得分3～4为2，总得分5～6为3， 总得分7为4。 4统计学方法 采用SPSS 13．0统计学软件进行统计学分析，各组实验数据以(硅，)表示。总体数据用0llle-Way ANOVA(单因素方差分析)作统计分析，用LSD检验作各组间均数两两比较。检验显著性水平设定为 P0．05。 结 果 I大鼠死亡情况左肾切除术后A组大鼠存活11只，B组存活17只，C组存活17只，D组存活18只， A组大鼠手第5w死亡1只。尾静脉注射ADR后，B组大鼠死亡7只，C组大鼠死亡5只，D组大鼠死亡7 只。C组、D组各有l例大鼠出现鼠尾腐烂现象，予以剔除。 2尿蛋白的变化第6w末B组、C组、D组大鼠尿蛋白明显升高，此后呈逐渐升高趋势，在整个 0．05)。见表1。 表1 各组大鼠24h尿蛋白定量的比较(矗，) 80 注：与同期A坌Jt O．05 3 时C组