巴氏杆菌耐药性检测芯片的研制.pdfVIP

An i mal Husbandr yVet er i nar y Medi c i ne 2008 V01 ．40 No．9 巴 氏 杆 菌 耐 药 性 检 测 芯 片 的 研 制 l 科 技 l 圈 金天明1，武迎红2 ，李向阳2 ， 刘海学1，王学理2 ，冯海华2 ，高 丰3 ’ ( 1．天津农学院动物科学系 。天津300384 ； 2 ．内蒙古 民族大学动物科技学院。 内蒙古通 辽028000 ； 3 ．吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 130062) 摘要：根据磺 胺耐药基因s ul l 、s ul l l ，链霉素耐 药基因st r A、s t r y ，氯霉素耐药基 因Ca t 2和四环素耐药基因Tet G多态性 位点和突变位点的基因 序列，设计特异性探针，构建耐药基因检 测芯片。利用该 芯片对巴氏杆菌耐药菌株进行检 测，得到的结果 与药敏检测结果完全一致。该研 究为巴 氏杆菌耐药基因的高通量、并行化、自动化和快速检测奠定了基础。 关键词 ：巴氏杆 菌；耐药性；基因芯片 中图分类号：$859．1 文献标识码：A 文章编号 ：0529-5 130( 2008) 09 ．0074—02 巴氏杆菌病(Pa s t eur eUos i s ) 主要是由特定血清 实验室标准化委员会( NCCLS) 的新规定及标准 型的多杀性巴氏杆 菌( Pas t eur el l a mul t oc i da) 引起畜 进行 ‘21 。 禽共患的一种烈性传染病⋯。大量流行病学调查资 1．4 细菌DNA的制备 料显示，由于抗菌药物的大量使用，导致巴氏杆菌耐 采用商业试剂盒提取DNA，置一20 ℃保存备用。 药性普遍存在，特别是高耐药菌株的出现，致使多数 1．5 引物和探针的设计与合成 药物对耐药菌的临床疗效降低或无效。 根据 巴氏杆菌标准菌株和耐药株 的耐药基因测序 本研 究拟利用基因芯片技术，研制一种用于巴氏 结果及基因库已公布的基 因序列，识别菌种 间多态性 杆菌耐药性筛选检测的基 因芯片，该芯片克服了现有 位点，使用DNASt ar 及 引物设计软件设计通用及菌种 技术 的不足 ，对巴氏杆菌常用抗菌药物产生 的耐药性 特异性探针旧J 。根据磺胺耐药基因sul l 、s ul H、链霉 进行检测和筛选，在一次反应 中进行多种信息的平行 素耐药基因st r A、s t r y 、氯霉素耐药基因Cat 2、四 分析 。由于其在检测中的高效率，因此要优越于传统 环素耐药基因Tet G序列多态性位点及磺胺耐药基因 的细菌学检测技术。应用该技术将有利于巴氏杆菌病 s ul H和链霉素耐药基 因st r A的突变位点设计8条特异 治疗方案的合理安排，提高巴氏杆菌病的防治水平。 性探针。见表1。 1材料与方法 表 1各探针核苷酸序列及对应 的待检基 因 1．1菌种和菌株来源 探针 序列 检测基因 P- 5 ’．TCC GCC CCCATGTCG CTC．3’ 5u盯 巴氏杆菌标准菌株和耐药株来源于中国药品生物