靶向LMP1基因siRNA作用对AP-1及其相关因子表达的影响.pdfVIP

中国癌症杂志 2008年第18卷第11N, CHINA ONCOLOGY 2008 Vo1．18No．11 816 靶向LMP1基因siRNA作用对AP一1及其 相关因子表达的影响 [摘要 ] 背景与 目的：潜伏膜蛋白LMP1是EBV基因组 日INhet)~ _BNLF1编码的一种跨膜蛋白， 它是发现最早的能在体外恶性转化细胞系的Egg潜伏期蛋白。本研究旨在探讨LMP1沉默对AP～l信号转导通路及 其下游与细胞转化、增殖和凋亡等相关因子转录表达的影响。方法：应用50nmol／L靶~JLMP1功能区编码序列 的siRNA649转染EBV~H性的胃癌上皮细胞GT38，分别作用24、48、72、96、120h，采用RTPCR检测c—Jun，生 存素，CDK4~HMMP9mRNA转录水平；免疫组化法检测细胞生存素蛋白表达；Western印迹法检Nc—Jun，JunB{~ CDK4蛋 白表达。结果：靶向LMP1特异性siRNA作用后，各时间点c—Jun*~生存素mRNA水平均明显低于细胞对照 组 (PO．05)，c—Jun以24h时降低最为明显，而生存素以48h时降低最为明显；CDK4mRNA水平均明显高于细 胞对照组 (P(O．05)；转染后24、48、72hm7MMP9mRNA表达水平均明显低于细胞对照组 (P0．05)，96h和 120h时M 9则无明显改变 (P0．05)。与细胞对照比较，cJun~llJunB蛋 白表达均下调，JunB蛋白表达在作用 第5天时有所恢复，CDK4蛋 白表达均上调。免疫组化检测结果显示转染后细胞质中代表生存素阳性的棕色颗粒 明显减少。 结论 ：靶向LMP1功能区编码序列的siRNA转染可影,NEBV~[性 胃上皮细胞AP一1及其下游相关因子的 表达，进而抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。 [关键词] EB病毒； 潜伏膜蛋白l； 活化蛋白 l； 胃癌上皮细胞 中图分类号：R73～34 文献标识码：A 文章编号2008)1卜0816—06 TheinfluenceofsiRNA targetingLMP1geneonexpressionofAP-1anditsrelatedfactors ￡ [， Xia，WANGXia0一feng，wANGYun，LIXin，FENGYi，LUoBJng (DepartmentofMicrobiology， OfngdaoUnlversity edicaiCollege，OingdaoSh315dong266021 China) Corresponde[1cetO：LUOBing E—maii：qdluobing~yahoo．coin [Abstract] Backgroundandpurpose：LMP1wasoneoftheproteinencodedbyEBVlatentgene，which wasfoundtobeabletotransform celllinesandalterthephenotypeofceilsduetoitsoncogenicpotentia1．Inhuman epithelialcells，LMP1altersmanyfunctionalpropertiesthatareinvolvedintumorprogressionandinvasions．In thisstudyweinvestigatedtheinfluenceofLMP1silenceonAP一1signaltransductionpathwayanditsdownstream factorsinvolvedwithcelltransformation，proliferationandapoptosis．Methods：Thechemica