阪崎肠杆菌蛋白质组学研究及特征蛋白的质谱分析.pdfVIP

第47卷 第5期 复 旦 学报 (自然科学版) Vo1．47No．5 2008年 10月 JournalofFudanUniversity(NaturalScience) Oct．2008 文章编号：0427—7104(2008)05—0620～07 阪崎肠杆菌蛋白质组学研究及 特征蛋 白的质谱分析 杨捷琳 ，魏黎明2，顾 呜 ，方晓明 ，韩 伟 (1．上海市出入境检验检疫局，上海 200135；2．复旦大学 生物医学研究院，上海 200032) 摘 要：阪崎肠杆菌为婴幼儿奶粉中新出现的食源性致病菌，生态学及毒力因子尚不清楚．利用双向电泳通过 裂解液组成、上样量 、聚焦时间等相关技术的比较研究和条件优化，获得阪崎肠杆菌菌体全蛋白双向电泳图谱， 提取部分蛋白质点进行胰酶酶解 ，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI—TOF／MS)测定肽质量指纹图 谱，MASU3T软件查询Swiss—Prot数据库，最终鉴定出阪崎肠杆菌中特异性蛋白，包括大肠杆菌氧化态硫醇过氧 化物酶A链 ，大肠杆菌SfaA蛋白，麦芽糖高亲和结合蛋自A链，饥饿应激蛋白，阪崎肠杆菌组成型表达蛋自，鼠 伤寒沙门氏菌脱氧核糖磷酸醛缩酶，大肠杆菌O157铁离子摄取调节子等，反映出阪崎肠杆菌与肠杆菌科近似菌 株蛋白表达的相似性及生长特性 ． 关键词：阪崎肠杆菌；双向电泳；质谱；特征性蛋白 中图分类号：Q936 文献标识码：A 1929年Pangolas报道了一种产黄色素的大肠菌群引起一例婴儿败血症 ，这是第一个有记载的阪崎肠 杆菌(Enterobactersakazakii)引起疾病的报道．随后的研究发现，阪崎肠杆菌对新出生婴儿，尤其是对发育 不 良、免疫功能差的婴幼儿最具杀伤力．来 自美国FDA的监测表明，在美国出生体重偏低的新生儿中，阪 崎肠杆菌感染率为8．7／10万；而 1岁以下婴儿阪崎肠杆菌感染率为 1／10万，感染者死亡率为20％至 50％l1l国内有关部门在调查某市场奶粉产品时发现，阪崎肠杆菌阳性发现率达到 12．6％ J．为此，2004 ， 年2月FAO／WHO在 日内瓦召开的婴儿配方粉中阪崎肠杆菌专家研讨会上提出由于婴儿配方粉中微量 的阪崎肠杆菌(3CFU／100g)污染也能导致感染的发生．所以应对奶粉和婴儿配方粉的加工制作过程、 家庭 ／医院的灭菌过程以及婴儿配方粉的储存和食用等关键控制点进行严格管理，减少该类产品的潜在危 险性[3]_ 阪崎肠杆菌属肠细菌属，为近年来新出现的致病菌，到 目前为止分子生物学水平上的研究国内还极为 缺乏．国外有研究建立了阪崎肠杆菌乳鼠内毒素和肠毒素毒性检测模型，利用出生 3～6d的乳鼠喂食或 腹腔注射阪崎肠杆菌培养物，测试结果显示4个样品分离株的肠毒素测试均呈微阳性，利用其培养物上清 检测培养的哺乳动物细胞，内毒素测试也为阳性，因此认为阪崎肠杆菌的毒力因子与内毒素有一定相似 性[4；也有研究表明在MTT实验中阪崎肠杆菌的脂多糖对N2a细胞具有毒性，推测蛋白酶、磷酸酶和脂 酶对于宿主细胞的死亡有一定作用 ；国外研究针对同一次爆发事件中分离获得的阪崎肠杆菌采用多种 分型方法(质粒分析、耐药谱、核糖体分型等)分析获得的结果基本一致，为此认为医院中食用的婴儿奶粉 以及冲调奶粉用的器具与疾病的感染相关[】．由于阪崎肠杆菌对渗透压和干燥具有较高的耐受力， KathinRiedeI等对正常状态下和高渗透压状态的阪崎肠杆菌蛋白表达谱差异进行了比较，推测该菌耐高 渗透压的能力与细胞内有大量的海藻糖酶有关[．目前国内对于阪崎肠杆菌的研究仍然较少，生态学及 收稿 日期：2007—03—1l 基金项目：国家质量监督检验检疫总局科技项 目(2006IK108) 作者简介：杨捷琳 (1978一)，女，工程师，博士，E—mail：yangil@shciq．gov．cn 第 5期 杨捷琳等：阪崎肠杆菌蛋 白质组学研究及特征蛋白的质谱分析 621 毒力因子以及阪崎肠杆菌的传播途径和环境中的来源还不十分清楚，研究基本处于空 白，急待深入． 基于以上情况，本研究旨在通过双向电泳技术结合基质解离激光辅助飞行时间质