乳清酸蛋白启动子克隆及其乳腺特异性表达载体的构建.pdfVIP

388 塑刿壅堂：兰塑!匿芏堕2 1111生!旦簦塑鲞箜!塑 系列研究Ⅱ作者简介 张教宪教授，博士生导师，享受政府特殊津贴专家，从事消化道肿瘤分子生物学研究工作多年。发袁学术论文50余篇， animal)是应用基因工程 培养博士生8名．硕士生15名，目前正在从事转基因动物的研究与应用工作。转基因动物(transgenic 手段，通过受精卵或胚胎干细胞的基因转移．将重组外泺基因稳定地整台八动物的染色体．在动物体内得以表达并能遗传络 后代的一类动物。转基因动物技术具有分子和细胞水平操作、动物整体水平产生生物学效应的优越性，应用谊项技术可建立 用其他方法无法替代的人类疾病的转基因动物模型。因此谊技术被称为继连锁分析、体细胞遗传和DNA重组之后的第四代 技术．将对生命科学尤其是医学科学研究产生全局性影响。目前我国开展这方面的研究工作较少。 组织型纤溶酶原激活荆(tissue—typeplasminogen 有生物活性的纤维蛋白溶酶，后者可水解纤维蛋白．使血栓溶解，并且不引起血纤溶酶原的系统性激活，因而大大降低了治疗 过程中出血的危险．作者在国内率先开展了tPA基因转基因动物的构建和研究工作，已成功构建了tPA乳腺特异性表速栽俸， 物模型，为进一步建立tPA转基因动物乳腺生物反应嚣提供了技术平台。 乳清酸蛋白启动子克隆及其乳腺特异性表达载体的构建 丁一1’王萍2’刘书漫2、 朱晓燕1’ 张钦宪1’ 1)郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研摩郑州4500522)河南省分子医学重点实验室郑州450052 关键词乳腺生物反应器；表达载体；乳清酸蛋白；启动子 巾图分类号R735．2 kb 摘要目的：克隆乳清酸蛋白基因(WAP)启动手并构建其载体。方法：以PCR技术克隆WAP启动子2．4 37kb A DNA片段和加polyA信号0 信号DNA片段；转化连接产物，以内切酶酶切、琼脂糖电泳鉴定阳性克隆，对插入片段进行序列分析。结果：琼脂 糖电泳显不，WAP启动子和加polyA信号DNA片段克隆成功；内切酶酶切鉴定阳性克隆．酶切片殷与预期长度一 致。插入片段序列分析与文献报道一致。结论：WAP启动子克隆及其乳腺特异性表达载体pwA构建成功。 ofWAP andconstructionof Cloning promoter mammary·-specificexpres—- sion vector D1NG Yi“，WANG Shuman”，ZHU Ping“，LIU Xiaoyan“，ZHANGQinxian。’ Basic and Medical of Embryology，Collegeof ，)DepartmentHistology Sciences，ZhengzhouUniversity 450052 Molecular 450052 Zhengzhou 2)HenanKeyLaboratoryof Medicine，Zhengzhou words acidic Key mammaryglandbioreaetoriexpressionvec