通路在肝癌细胞自体吞噬中的作用研究.pdfVIP

20o7年 2月第 6 February20o7。Vo1．6，No．1 · 39 · · 论著 · PI3K／AKT／mTOR信号通路在肝癌细胞 自体吞噬中的作用研究 史颖弘 樊嘉 周俭 邱双健 殷晓呜 汤钊猷 【摘要】 目的 探讨在肝癌细胞中Pi3K／AKT／mTOR信号通路在氨基酸缺乏诱导的自体吞噬中的作 用。方法 观察 HCCLM3、MHCC97L及 SMMC-7721肝癌细胞在 氨基酸缺乏情 况下及与 PI3K抑制剂 3-MA、Wortmannin及 LY294002，mTOR抑制剂雷帕霉素协同作用下细胞活力变化。GFP—LC3荧光法观察细 胞内自噬体的形成。Western印迹检测LC3一lI蛋白的表达。结果 经无氨基酸培养液 EBSS处理后48h， HCCLM3、MHCC97L及SMMC-7721细胞存活率分别为 (78．9±3．8)％、(57．2±13．1)％及 (3．4±3．0)％ (P 0．O1)。与 HCCLM3、MHCC97L相 比，细胞中的 自噬体在 SMMC-7721细胞 中明显增 多，分别为 (13．1±3．5)％、(20．0±1．1)％及 (48．9±4．5)％(P0．O1)。Western 印迹显示在 EBSS处理后早期即 有 LC3一Ⅱ蛋 白的明显表达。在EBSS基础上雷帕霉素 20 mol／L处理 24h，3种细胞株活力明显下降。 3-MA、Wortmannin及LY294002处理也加速 EBSS诱导的细胞死亡。结论 高转移潜能肝癌细胞比较耐受 自噬样细胞死亡。PI3K／AKT／mT0R信号通路对 自噬样细胞死亡可能起重要调节作用。 【关键词】 肝肿瘤； 自体吞噬；mTOR 【中图法分类号】 R735．7；R730．3 【文献标识码】 A RoleofPI3K／AKTl／mToR pathway inautophagyofhepatcellularcarcinomacells ．s Ying-hong． FAN Jia，Z日0 Jian，QIUShuang-ji0n，，，．ⅣXiao—ming， ^ Zhao—you．LiverCancer m e，Zhongshan p— tal，FudanUniveristy，Shanghai200032，China 【Abstract】 Objective ToevaluatetheroleofPl3lAKTl／ⅡlT0Rpathwayinautophagyofhepatocellular cracinomacellsinducedbyaminoacidstarvation．Methods Thecellviabilitywasmeasuredafteraminoacid starvation，PI3Kinhibitors(3-MA，Wortmannin，LY294002)andmTORinhibitorRapamycintreatmentsinhepa— toeellularcracinomacelllineswithdifferentmetastaticpotentials．Theautophagosomeinhepatocellularcarcinoma cellswasobservedbyusingGFP—LC3fluorometricmethodandLC3一Ⅱ proteinexpressionbyWestern blotting． Results Thecellviabilityafteraminoacidstarvationfor48hourswas(78．9±3．8)％ forHCCLM3．(57．2± 13．1)％ forMHCC97Land(3．4±3．0)％ ofrSMMC-7721，withstatisticaldifference(P 0．O1)．Theauto． phagosomeinHCCLM3wassignificantlylowerthaninMHCC97LandSMMC-772 (P 0．01)．whichwas (13．1±3．5)％，(20．0±1．1)％ and(48．9±4．5)％ respectively．WesternblottingshowedthatLC3一lIpro． teinwas high