人源胰蛋白酶-1与dsba在e.coli中的融合表达【精选】.pdfVIP

20l4年 11月 化 学 工 业 与 工 程 第 31卷 第 6期 NOV． 2O14 CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING VoI．31 No．6 doi：10．13353／j．issn．1004．9533．2014．06．014 人源胰蛋 白酶-1与 DsbA在 E．coli中的融合表达 ～工一中 张文勇 ，王大梅 ，甘一如 ，黄 鹤 (1．系统生物工程教育部重点实验室，天津大学化工学院，天津 300072；2．北京甘李药业有限公司，北京 100026) 摘要 ：从供体动物获取 的胰蛋 白酶可能含有致病微生物的残 留，目前急需重组胰 蛋 白酶的生产。 按照密码子使用频率表 ，对人源胰蛋白酶一1的基 因序列进行简并突变，并与质粒 pET一39b(+)携带 的DsbA融合 ，实现了胰蛋 白酶在大肠杆菌中的表达。重组蛋 白主要 以包涵体 的形式存在 ，约 占菌 体总蛋 白的40％。包涵体经洗涤、变性、复性和凝血酶激活后 ，依照市售猪胰蛋 白酶的量 ，每 1L发 酵液得到 1．6mg有活性的胰蛋 白酶，实现 了人源胰蛋白酶在原核生物 中的大量表达。 关键词 ：人源胰蛋 白酶．1：包涵体 ；DsbA 中图分类号 ：Q55 文献标志码 ：A 文章编号 ：1004—9533(2014)06—0075—05 FusionExpressionofHumanTrypsin-1withDsbA inE．coli ZhangW enyong ，W angDamei一，GanYiru ，HuangHe (1．KeyLaboratoryofSystemBioengineeringofMinistryofEducation，SchoolofChemicalEngineeringandTechnology TianjinUniversity，Tianjin300072，China；2．Gan＆LeePharmaceuticalCo．Ltd．，Beijing100026，China) Abstract：The trypsin obtainedrfom animalsourcesmay contain infectiousagents，currently itisin ur· gentneedofproductionofrecombinanttrypsin．Accordingtothecodonusagerfequencytable，thebases ofhumantrypsin一1werechangedbydegeneratecodon，and then thesequenceswerefusedwiththeDsbA rfagmentC—terminalinthevectorpET一39b(+)．TheclonedE．coliwithrecombinantvectorachieved expression．Recombinantproteinsmainlyexisted in theform ofinclusion bodies，accountingforabout 40％ ofthetotalbacteriaproteins．Bywashingthepelletproteins，denaturation，renaturationandthrom— binactivation，wegot1．6 mg activated trypsin perliterfermented liquid with thecommercialporcine trypsin asa standard，andachieved efficienthumantrypsin expression inprokaryotes． Keywords：humantrypsin-1；inclusionbodies；DsbA 胰蛋 白酶 (trypsin，EC3．4．21．4)是丝氨酸蛋 白 异性切割 ，转化为起作用 的胰 岛素 ，但是 目前所