人脐带沃顿胶间充质干细胞体外分离条件的优化及传代效应的流式细胞学检测【精选】.pdfVIP

142 TianjinMedJ，Feburary2015，Vo1．43No．2 人脐带沃顿胶间充质干细胞体外分离条件的优化及 传代效应的流式细胞学检测 洪敬欣 ，李茜 ，韩俊领 摘要：目的 观察不同胶原酶消化方法对人脐带沃顿胶间充质干细胞(mesenchymalstemcell，MSC)分离和培养 结果的影响，并鉴定其分化潜能；探讨传代效应对其免疫表型的影响。方法 将制备好的脐带标本分别加入 I型、 Ⅱ型及Ⅳ型胶原酶，持续消化4—18h，筛网过滤，离心收集细胞，用 DMEM／F12培养基重悬细胞 ，调整细胞密度4．8x 10一lxl04／cm。，接种培养，比较不同消化法分离人脐带沃顿胶MSC的效果。Vonkossa钙结节染色、四环素荧光标记 鉴定人脐带沃顿胶MSC向成骨方向分化的能力，RT—PCR鉴定其向心肌细胞分化的能力。应用流式细胞仪检测连 续传代后 MSC的免疫表型变化。结果 I型胶原酶消化法能够从人脐带沃顿胶获取 了数量较多、活力较高的 MSC，而且细胞出现伸展的时间及原代培养时间均短于 Ⅱ型胶原酶及Ⅳ型胶原酶消化法。表面标记分析显示：随着 传代次数的增加，阳性标记CD29、CD44、CD73、CD90、CD105的表达百分率没有变化，而阴性标记CD31、CD34和 HLA—DR的表达率增加明显。体外诱导实验表明：来源于人脐带沃顿胶的MSC具有体外成骨和成心肌样细胞分化 的能力。结论 I型胶原酶消化法简单易行 ，对细胞损伤小，能稳定、高效地从人脐带沃顿胶中分离出MSC。 关键词：脐带；间质干细胞；胶原酶类；传代效应；沃顿胶 中图分类号 ：R394．2 文献标志码：A DoI：10．11958~．issn．0253—9896．2015．02．008 Optimizationthemethodologyofisolatinghumanubilicalcordmesenchymalstromalcellsfrom WhartonSjellyandexaminationoftheirpassageeffectonimmunephenotypeusing flowcytometry HONGJingxin，LIQian一，HANJunling’ JUnionStemCellGeneEngineeringCo．，Ltd．，TianjinCordBloodBank，Tianjin300384，China；2InstituteofHematology, BloodDiseaseHospital，PekingUnionMedicalCollegeandChineseAcademyofMedicalSciences CorrespondingAuthorE—mail：hanfll@126．com Abstract：0bjective Toobserve,theeffectsofdifferentcollagenasedigestionsonisolatinghumanumbilicalcord mesenchymalstromalcells(MSC)fromWharton’Sjelly，toexamtheirdifferentiationabilityandtoinvestigatetheirpassage effectontheimmunephenotype．Methods HumanumbilicalcordsamplesweredigestedbycollagenaseIorIIor1V for 4—18hoursthenwerepassedthroughsieves．CellswerecollectedbycentrifugationtheninoculatedinDMEM ／F12medium atconcentrat