亚低温对脑出血后血脑屏障内皮细胞rho激酶ⅱ表达影响的研究【精选】.pdfVIP

V0I．32 2014 No．17 亚低温对脑出血后血脑屏障内皮细胞Rho 激酶 Ⅱ表达影响的研究 李晓玲 ，，张 博2，石正洪 1 (1．兰州大学第二医院，甘肃 兰州 730030；2．兰州大学第一医院，甘肃 兰州 730000) 摘 要：目的 通过观察亚低温对实验性脑出血后的血脑屏障(BBB)、BBB内皮细胞Po激酶Ⅱ的影响。进一步探讨亚低温 减轻血管源性脑水肿的机制。方法 将健康雄性SD大鼠(54只)随机分为3组：生理盐水组、脑出血组和亚低温+脑出血组。 采用 自体血注入法建立脑出血模型，伊文思蓝浓度测定BBB通透性、脑水含量 (干湿重法)。观察各组大鼠BBB内皮细胞 Rho激酶Ⅱ的表达(免疫组化法)。结果 脑出血24h后BBB通透性开始增加 ，72h达高峰，7d后开始下降，其变化趋势与 脑水含量及 BBB内皮细胞Pdao激酶 Ⅱ的表达一致。亚低温+脑 出血组的BBB通透性、脑水含量及BBB内皮细胞Rh0激酶 Ⅱ的表达均低于脑出血组。结论 脑出血后血管源性脑水肿的形成与BBB内皮细胞Rho激酶 Ⅱ的高表达有关；亚低温可以 通过减少其表达来减轻BBB通透性的增加，减轻脑水肿 ，进一步保护脑组织。 关键词：亚低温；脑出血；血脑屏障；Rho激酶Ⅱ 中图分类号：R364．3 文献标识码：B 文章编号：1671—1246(2014)17_014o_03 脑出血 占急性脑血管病的20％一30％，急性期的病死率约 电子温度计 (大连欧姆龙)间隔 15mill监测肛温。亚低温+脑出 30％--40％，是一种严重危害人类健康的疾病。脑出血后神经功 血组在脑出血后 10min内将大鼠放在冰毯上用冰块覆盖降温， 能恶化最重要的原因是脑水肿的形成。血脑屏障(BBB)破坏是 约 15min左右降至(33．0~1．0)℃，脑出血组及生理盐水组肛温 脑出血后脑水肿发生发展的—个重要病理生理过程】】【。目前有报 维持在 (37．5~1．O)℃，并在大鼠苏醒后(一般为3h左右)再次给 道显示 ，Rho激酶的表达是导致炎症等多种病理反应过程中血 予 10％水合氯醛以150mr,／kg剂量腹腔麻醉。大鼠6h后在室 管内皮通透性升高的原因之一口。亚低温已经被证实可以减轻 温下 自动复温。 脑出血后脑水肿霸，但能否通过对脑出血后BBB内皮细胞Rho 1．2．3冰冻切片制备 各组大 鼠在出血后不同时间给予 10％水 激酶 Ⅱ的变化产生影响尚未见相关报道。本实验通过观察采用 合氯醛以400mg／Ig【剂量腹腔麻醉，仰卧位固定于动物脑立体 自体血注入法建立的大鼠脑出血模型BBB内皮细胞Rho激酶 定位仪上，剪开胸腹腔，夹闭下腔静脉及胸主动脉，4％多聚甲醛 Ⅱ表达的变化来探讨脑出血后脑水肿形成的可能机制。 溶液 250IIll经心腔灌注固定，断头取脑，沿针孔冠状面切开，将 1材料与方法 针孔后脑标本置于4％多聚甲醛溶液中固定72h，后用 20％蔗 1．1 实验动物分组 糖溶液脱水固定72h，在注射针道平面切取脑组织块后以冰冻 SD雄性大鼠54只，鼠龄 10～12个月，体重(275~25)g，由 切片机 (LeieaCU1850)行冰冻切片，每张厚度 10p．m。 北京天坛医院动物房提供。将其随机分为3组：生理盐水组、脑 1．2．4BBB内皮细胞 Rho激酶 Ⅱ免疫组化染色 按以下步骤 出血组和亚低温+脑出血组。每组又分为脑出血后24h、72h、7 进行免疫组化染色：(1)去除玻片上多余的水分，滴加3％过氧 d3个亚组。 化氢抑制5rain；滴加—抗 1：10o(羊抗小鼠PAR一1抗体)，4℃放 1．2 方 法 置过夜，0．1mol／LPBS液冲洗5min，反复3次。(2)滴加生物素 1．2．1脑出血模型 大鼠