猪肌肉生长抑制素基因5%27调控区不同基因型对其表达水平影响.pdfVIP

猪遗传育种 猪肌肉生长抑制素基因5’调控区不同基因型对其表达水平的影响 刘东君，徐勤迎，姜运良牛 山东农业大学动物科技学院，泰安271018 关键词：猪；肌肉生长抑制素基因；5’调控区；表达载体；细胞转染；荧光定量 引言 型对猪的一些生长和肉质性状产生有利效应。在此基础上，本研究将猪抑肌素基因57调控区的3个突变位点 全部考虑在内，研究启动子区不同基因型对抑肌素表达水平的影响。 材料方法 A．A-T是猪群中实际存在的单倍型，其余四个为理论上存在的单倍型。将构建好的8个载体用脂质体转染的 方法转染小鼠的c2C。2细胞，用双荧光素酶报告基因检测系统对荧光素酶活性进行测定，对比8个载体荧光素 酶的表达水平。与此同时，在鲁莱猪中构建一个全同胞家系和一个半同胞家系，其仔猪基因型都分别为BC 型和CC型。在仔猪生长到30d时进行屠宰，采样部位为背腰最长肌(LD)、半腱肌(ST)、半膜肌(SM)， 用荧光定量PCR的方法对不同基因型间抑肌索mRNA的表达量进行了检测。 结果 本研究采用定点突变的方法，成功获得8个以抑肌素基因5’调控区作为启动子、以萤火虫荧光素酶作为 报告基因的表达载体。载体导入细胞后的双荧光素酶活性测定结果表明：在已经发现的4种单倍型构建的载 率差异极显著。8个启动子中，启动效率最高的为pGL3．H，其次为pGL3．D。在鲁莱猪全同胞和半同胞家系 的结果相符；但是在SM中，BC型抑肌素mRNA的表达量小于CC型，且在全同胞家系中达到了极显著水 平(P=O．0038)。 讨论与结论 不同猪种在骨骼肌发育相关性状上的差别很可能与抑肌素的表达水平有关，其中5’调控区核苷酸序列的 突变很可能会改变该基因的上游应答元件进而影响该基因的表达水平。本试验从体内和体外两个方面比较了 肌性状的关系的研究正在进行中。 致谢 方面的帮助。 串通讯作者：yljian9723@yahoo．corn．ClI 一31l一