Nanog在肿瘤发生和维持中的功能研究.pdfVIP

130 Nanog在肿瘤发生与维持中的功能研究 林艳丽，熊福锿，吴晓洁，周艳荣，吕月蒙，陈红星 军事医学科学院生物工程研究所 近年来，随着干细胞生物学的发展以及对肿瘤研究的深入，越来越多的证据表明干细胞与 肿瘤细胞在生物学特性、信号通路等方面具有惊人的相似性，提示二者可能存在密切的关系。 转录因子Nanog在干细胞的自我更新和多能性维持中起着重要作用，因此，Nanog分子在肿瘤 的发生和维持中可能扮演重要角色。 目前已经有相当多的证据支持我们的设想。已经在各种肿瘤中检测到了Nanog的表达，包 括生殖细胞瘤、胚癌、眼癌、前列腺癌和乳腺癌细胞MCF-7。我们怀疑Nanog对于肿瘤的发生或 维持具有普遍意义，我们通过RT—PCR及Western blot检测了多种肿瘤细胞中Nanog的表达， 前列腺癌细胞PC一3、肺癌细胞A549等，结果发现这些细胞均有Nanog的表达。 我们判断Nanog的表达失控可能是导致肿瘤发生发展的原因之一。因此在正常体细胞 为对照。观察Nanog是否具有恶性转化能力，并且进一步研究Nanog是通过什么分子机制导致 这些后果的。 293细胞的生长。绍胞在软琼脂上锚着转依赖生长锗力是体外细胞培养条孛事下衡量缨胞恶性程 度的重要指标，结果发现，不管接种的细胞数量多少，293-Nanog的软琼脂克隆形成的数量和 293一control相比皆有明显的提高，而和阳性对照宫颈癌细胞HeLa相比数量近似。 软琼脂集落生长能力和上皮细胞的致瘤性是密切相关的。裸鼠成瘤试验结果显示注射有 293一Nanog细胞的裸鼠在注射后第5天就形成肿瘤。对照组只有2只形成肿瘤，而这些肿瘤是 约比对照组重85％以上。 将两组形成的肿瘤解剖下来分别作组织切片HE染色，结果发现，293一Nanog细胞形成的 肿瘤组织切片中肿瘤细胞分化差，大小形态很不一致，可见瘤巨细胞，肿瘤细胞核深染，染色质 呈粗颗粒状，分布不均，堆积在核貘下，病理性孩分裂象常见，部分小鼠肿瘤组织已浸滤刭周屡 肌肉组织中。而对照组肿瘤有包膜样结构，肿瘤细胞分化较好，胞核淡染。由此可见，Nanog不仅 可导致293细胞的成瘤能力，也能促进肿瘤的恶性程度。 为了进一步研究Nanog的致瘤机制，我们通过双向电泳寻找由于Nanog的表达差异导致 的蛋白水平差异，发现了3种与肿瘤密切相关的蛋白表达发生上调，分别为FAK／PTK2和 Ezdn／Villin2及c-jun蛋白。我们分别通过Western Nanog细胞中呈上调表达，而这3种蛋白与癌症的增殖、存活和转移密切相关，这些蛋白的上调 可能是293细胞发生恶性转变的主要原因之一。