肝脏特异性高表达血清型IgD转基因小鼠模型构建.pdfVIP

肝脏特异性高表达血清型IgD转基因小鼠模型的构建 王萍，李宁，赵要风 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京100193 关键词：小鼠；高IgD综合症；WesternBlot；Elisa 引言 1965年Rowe和Fahey在骨髓瘤病人的血清中发现了IgD，后来他们又在正常人的血 清检测到IgD；最初被认为只存在于啮齿类和灵长类中，后来研究发现其几乎存在于所有有 颌类脊椎动物中；IgD在进化上与IgM～样古老，且不同物种存在很大结构差异。由于其在 血清中含量极低，半衰期短，所以对其研究还不彻底，不知道其功能。此外，高]gO综合症 在人种中的分布也越来越广，极大的危害了人类的健康，但目前还不清楚其发病机理。高表 达血清型IgD转基因小鼠模型的构建，旨在找IgD的受体，探讨其功能，并期望为高IgD 综合症研究和治疗提供一些资料。 材料方法 通过融合PCR的方法获得含有人IgG可变区、小鼠IgD恒定区的嵌合6基因CDS区和 含有人K链可变区、小鼠K基因恒定区的嵌合K基因CDS区，将其分别插入到pcDNA3．1+ 多克隆位点；然后，用小鼠血清白蛋白启动子替换CMV启动子，从而构建成肝脏特异性表 达载体；两个表达载体进行线性化，得到分别含有IgD重链和K链，长为4062bp和3570bp 的目的片段并显微共注射。运用PCR、Western blotting和Elisa等方法对小鼠进行阳性鉴定 和其它相关分析。 结果 在启动子和BGH pA分别设上下游引物，得到F0代6、K共阳性小鼠9只。通过RT-PCR 和Q．PCR得到各个家系目的基因在RNA水平都有表达；且WesternBlot和Elisa结果显示 F0．3，4，15，37家系目的基因表达较高，都在20％以上；在这些高表达家系中，均出现了 病例症状：无痛向外扩张性皮损，眼睛水肿和肝脾肿大。以同窝阴性小鼠血清作对照，对阳 到影响，IgG和IgE含量升高，而]gA的含量下降。 讨论 目前，高IgD综合症是人们研究的一个热点，其常伴随IgD的升高、IgA的升高和周期 性发热、皮炎、眼睛水肿和肝脾肿大等病理症状，部分认为此病与甲羟戊酸激酶(MVK)基 因的突变、缺失有关。对MVK基因敲除研究发现，MVK的缺失确实能导致该病理现象， 但导致这些炎症反应是由于IgD的升高引起，还是IgD的升高只是其敲除的一个结果，这 个问题还不清楚。本研究发现，IgD的升高也能引起无痛向外扩张性皮损，眼睛水肿和肝脾 肿大等炎症反应；肝脾肿大非常明显，达到正常小鼠的5-6倍；然而，血清IgA含量是下降 的，这可以说明IgA不是引起炎症的直接原因，IgD是否就是直接原因还需进一步研究。此 外，血清中IgG和IgE的升高可能是因为IgD的升高影响到B细胞的发育所致，这一方面 我们还要通过骨髓和脾脏B细胞的流式再进一步验证。研究表明，可以通过转基因技术使 免疫球蛋白进行稳定高表达，该转基因模型成功的构建有利于我们以后找IgD的受体，探究 其功能；同时，也为高IgD综合症的诊断和治疗研究提供了一点思路。 致谢 本研究受转基因生物新品种培育重大专项课题(2008ZX08006．001)资助。