西农萨能羊脂肪酸合酶基因(FASN)启动子元件定点突变分析.pdfVIP

·68· 第一部分 统计遗传学、数量遗传学和生物信息学 西农萨能羊脂肪酸合酶基因(FASN) 启动子元件的定点突变分析 李君，罗军，胡仕良，许会芬，姚大为 (西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌712100) 引曹 acid FASN)是哺乳动物脂肪酸合成过程中的关键酶，它利用乙酰一CoA、丙二酸单 脂肪酸合酶(Fattysynthase 风味和品质方面具有重要作用，乳中的脂肪酸组成是影响乳品风味和品质的重要因素之一，因此对FASN进行调 控。达到生产出高品质乳品的目标具有重要意义。本实验室前期研究已经克隆得到FASN启动子序列，并且通过缺 失分析表明，FASN核心启动子位于转录起始位点上游293bp区域内，启动子在线软件预测发现，该区域还有潜在 其对FASN基因的转录调控作用。 材料与方法 化后，以扩增的两条片段(比例1：1)为模板，再次PCR获得一条启动子突变体，将此突变启动子插入荧光素酶报告基因载 胞，双荧光素酶报告检测系统测定启动子活性。每组设3个重复。 结果 通过重叠延伸PCR扩增得到FASN基因启动子的3个转录因子结合位点突变体，酶切鉴定和测序结果表明突变启 动子荧光素酶报告基因载体构建成功。转染山羊乳腺上皮细胞后，启动子活性分析表明，与野生型FASN启动子活性相 野生型启动子相比没有显著性差异。 讨论与结论 FASN基因的表达没有影响。人和鼠FASN基因启动子的许多重要顺式作用元件已经被鉴定，FASN基因调控区有两个 位点参与了胰岛素对FASN基因的转录调控作用，凝胶阻滞实验和染色质免疫共沉淀分析也已证实SREBP确实和这些 结合位点结合，对结合位点进行突变后，则导致启动子活性显著降低，说明SREBP作为基本的转录因子参与FASN基因 的表达。Moon等人研究发现N卜．Y参与了多不饱和脂肪酸对FASN启动子的抑制作用，而本实验结果显示突变N卜_Y 结合位点后对FASN启动子没有显著影响。 因此，在下一步的研究中，可以通过凝胶阻滞、染色质免疫共沉淀和RNA干扰等实验，确定上述转录因子在FASN 基因的转录调控以及山羊乳脂肪酸代谢过程中的作用。 关键词：西农萨能羊；FASN基因启动子；重叠延伸PCR；定点突变 致谢：本研究受转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08(K)9-162B)资助完成。