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分子系统学、进化与资源评价
猪BMPl5基因外显子2部分序列的克隆与序列分析
陈伟，宋一萍，曾勇庆木，钱源，崔景香，陈其美，杜金芳
山东农业大学动物科技学院，泰安271018
关键词：猪；BMPl5；cxon2；克隆；序列分析
引言
骨形态发生蛋白(bone protein，BMPs)家族是转移生长因子超家族的一大类，它们与两类
morphogenefic
特异体结合组成信号传导通路诱导细胞内的一系列生理活动。研究表明，BMPl5对雌性繁殖性能有重要作用，
特别是对卵巢的作用尤为明显。Galloway等(2000)从绵羊的肝、心、肾、骨骼肌、肌肉、脑垂体、子宫、
胎盘、肾上腺、卵巢和睾丸中抽提总RNA，用RT-PCR检测了引咿J5基因在这些组织或器官中的表达情况。通
意义是推动哺乳动物体内卵母细胞卵泡生长，同时阻止黄体早熟。本研究通过检测BMPl5基因的突变位点，
为进一步研究该基因的多态性及其与产仔性能的相关性奠定基础。
材料方法
取猪耳组织作为实验样本，采用酚一氯仿抽提法从样品中提取基因组DNA后进行BMPl5基因的PCR扩增。
h；取转化菌液涂于含AMP+的LB平板，37℃培
选择pMDl8．T载体；将PCR产物、pMDl8．T载体，16℃连接2
进行琼脂糖凝胶电泳鉴定及菌液PCR鉴定。将鉴定正确的阳性克隆质粒进行序列测定。将所测序的BMPl5基
因外显子2部分序列与NCBI上公布的人、鼠、牛、绵羊等的DNA序列进行比对，进行保守序列分析。
结果
PCR产物经1．5％的琼脂糖凝胶电泳检测，所扩增片段在280
bp附近有一明显的条带，与目的条带281bp相
部分序列。利用Pairwise
处，由A突变为T；另一个位于第155个核苷酸处，由C突变为T。
讨论与结论
BMPl5基因在人、鼠、羊的研究中比较重要且深入，其主要功能是控制卵巢的排卵。本研究利用已经克
隆的人、鼠、和猪BMPl5基因序列的同源性，设计了猪BMPl5基因的引物，获得了该基因外显子2的部分序列。
通过同源性比对可知猪的BMPl5基因cDNA序列与牛、人、小鼠和羊的同源性非常高，其中猪与蒙古羊的同源
1
和exon2是高度保守的。尽管BMPl5基因在物种的进化中比较保守，但差异还是比较大的。本实验通过基因组
DNA
PCR扩增产物的克隆、测序，结果发现在外显子2的第106和第155两个位点处发生突变，该位点的突变使
I的酶切位点发生了变化。此两个位点的突变表明；在猪群中BMPl5基因外显子2中可能存在
限制性内切酶Spe
关分析。
致谢
究员在样品采集方面的帮助。
术通讯作者，Tel：0538-8196883，E—mail：yqzeng@sdau．edu．ell
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