苏云金芽孢杆菌新型杀虫蛋白基因的研究和开发.pdfVIP

10 农业生物灾害预防与控制研究 苏云金芽孢杆菌新型杀虫蛋白 基因的研究与开发 黄大防1，2张杰2宋福平2郎志宏1 (1．中国农业科学院生物技术研究所，北京100081； 2．中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100094) 苏云金芽孢杆菌(Bacillus 生物防治具有巨大的开发应用潜力。通过生物技术手段可以进一步提高杀虫毒力、拓宽杀虫 谱、预防或延缓抗性，以及增强杀虫蛋白的表达量和稳定性。为了克服目前Bt基因应用中 基因背景单一、杀虫对象狭窄等不足，可采用以下三种策略对其进行遗传改良：①新型杀虫 蛋白基因的分离克隆；②基因的叠加与组合；③不同的基因转化与表达体系。 在新基因研究方面，可以cry8类基因为例： 产物同已报道的crySCal蛋白仅有1个氨基酸的差别，对铜绿丽金龟(Anoma／acorpulenta)和 cry8D蛋白氨基酸同源性在78％以下，经国际Bt基因命名委员会认定属于新的cry8类基因， 命名为cry8Eal。生测结果显示该基因对暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)幼虫有很高的毒 有效的相关报道。对于我国各地造成大豆、花生、马铃薯、草坪草受害的地下害虫多以上述 几种蛴螬为主，有关新型杀虫蛋白基因的发掘为控制日趋严重的蛴螬为害带来了希望。 在基因组合叠加研究方面，可以cry3Aa7和crylBa3基因为例： 自Bt uvl7菌株，获得了对鞘翅目害虫有效的cry3和对鳞翅目害虫有效的cryl两类基因叠加的工 程菌株G033A和UVl73A。室内生测和田间试验结果证实，这两种工程菌对鞘翅目的马铃薯 甲虫、黄条跳甲，鳞翅目的棉铃虫、甜菜夜蛾等害虫具有很好的兼治作用。 农作物害虫水稻二化螟和玉米螟分别具有协同增效作用。 为了让Bt杀虫蛋白稳定和充分地发挥杀虫作用，进一步开展杀虫基因转化植物的研究 十分重要。在这一方面，抗虫棉的研究开发已经树立了成功的范例。考虑到转基因植物可能 比工程菌剂对控制地下害虫蛴螬的为害更为有效，我们尝试以烟草为受体植物，开展了 crySCa2转基因研究。在对cry8Ca2基因进行密码子优化和随机突变等修饰改造的基础上， 引入了根部组织特异表达启动子TobRB7，分别通过所构建的两个转化载体pBTmCN和pBSm． CN将该基因导入烟草。分子检测和生物测定结果均证实crySCa2基因能在植物根部高效表 达。未转基因阴性对照植株根系因蛴螬为害而严重受损，而转基因植株的根系和地上部均生 长正常。这一结果表明培育抗虫转基因植物可能是防治地下害虫蛴螬的有效途径。