阿霉素和肝癌细胞相互作用的显微荧光成像方法研究.pdfVIP

刊 分析试验室 Vol.24.Su即1. 月 chimn 加aurala#Amly幽 2005一10 阿霉素与肝癌细胞相互作用的显微荧光成像方法研究 彭 迪，张 蓉，郑国灿，姜军坡，黄 锐，肖尚友，夏之宁 ‘ (重庆大学化学化工学院，重庆400044) 阿霉素(Adriamycin,ADM)是临床广泛使用的 后，取出培养板放人事先准备好的超净台中，抽出 具有高效抗癌活性的葱环类抗菌素，其抗癌作用机 培养液(注意不可伤及底部细胞)，加人50回ml的 制，一般认为是通过与DNA发生嵌插相互作用而 AO水溶液，每孔10风，作用5min后把不同浓度的 起到抗癌作用的。目前对其药理作用的研究多限 阿霉素加人培养孔中，每孔加人20风;在不同的时 于阿霉素或阿霉素和金属离子的配合物与DNA相 间在IX71倒置式研究型显微镜(日本，OLYMPUS) 互作用的光谱学研究[(1,21，其过程往往涉及较复杂 下观察细胞荧光的变化情况并摄像。最后使用 的谱学分析，缺乏快速简便的定量评价其活性的方 AdobePhotos吻6.0对所摄照片进行图象处理，采 法。本研究采用荧光显微成像方法，使用荧光探针 用Scatchard方程对所得数据进行拟合。 叮咤橙(AcridineOrange,AO)染色肝癌细胞，多个 结果:将得到的不同时间不同药物浓度的荧光 叮吮橙单体与肝癌细胞内DNA结合后，形成 (颜色)强度值。0min时的荧光强度Fo，其它时间 (AO)二一DNA复合物，该复合物在蓝光激发下发出 荧光(颜色)强度为F，计算不同时间不同浓度阿霉 绿色的荧光。加人阿霉素后，若阿霉素能进人肝癌 素作用后的荧光(颜色)相对强度FIFo，对FlFa- 细胞并与核内DNA结合，则会与叮吮橙将出现络 作‘图(图1)，从图1中可以看到，阿霉素与肝癌 合竞争[[31，使(AO)二一DNA复合物的荧光受到抑制 细胞作用后荧光(颜色)相对强度减弱，在10一12 而减弱。提取相互作用前后图像的色度学颜色参 min后趋于稳定，这说明阿霉素与肝癌细胞中DNA 数(G一绿色)来表征荧光强度，以此求得了阿霉素 的相互作用在10一12min以后，基本达到平衡状 与肝癌细胞相互作用的结合常数和结合位点数。 态。因此，我们采用阿霉素与DNA作用10和12 min所获得的数据进行Scatchard方程线性拟合，K6 二4.22x103moUL,n二0.2927(10min)和凡二 苏 ﹄ 2.86x103mol/L,n二0.4880(12min). 吸 本研究针对活体细胞，在保持细胞结构和功能 的完整性的前提下，以荧光显微技术为手段在细胞 00..6700 -,...-.,7: 水平上实现了相互作用信息的获取。因此，该法有 0 12 24 36 可能发展成为药物体外活性筛选的新方法。 tlm恤 关健词:荧光显微成像;相互作用;阿霉素;肝癌 圈1不同的阿.索浓度下，荧光橄《色》强度相对值随时 细胞 间的变化圈 1一254mL;2一50呵mL;3一100对mL;4一200pg/mL 参考文献 [1]赵晓杰等. 方法:经过细胞复苏、传代培养后，将细胞密度 生物化学杂志，1994,10(3):