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禽传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核
表达载体VRl
020和pVAXl的构建
张有峰“2，王红宁木”，阳泰1，田浪2，谭兵2，汤竞元1，朱麟2，汪雪2
(1．四川大学生命科学学院，
四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，四川成都610064；
2．四川农业大学动物医学院四川雅安625014)
IE基
本研究采用分泌型真核表达载体VRl020(以pUCl8为骨架，具有CMV
因的启动子、增强子、内含子A序列、TPA信号肽序列和BGH转录终止序列及
基因的真核表达质粒。
根据禽传染性支气管炎病毒(IBV)本课题组分离株SAIBK的全基因组序列
基因的六对引物，加上相应的酶切位点。其中，N基因上的第375bp处有一Bgl
II)的克隆，设
Ⅱ酶切位点，为方便载体VRl020(多克隆位点为：BamHI和Bgl
计并合成一对定点突变引物。分别利用合成的特异性引物，通过RT—PCR方法从
技术进行定点同义突变处理，并进行测序鉴定，对突变的N基因进行测序，结
Sl、M和N基因经双酶切处理后分别亚克隆到经相应双酶切处理的VRl020和
I+蒯)
条带。双酶切鉴定结果表明，Sl、M和N基因的6个重组真核表达质粒构建正
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确。
酶切鉴定后用PEG8000进行纯化，在脂质体的介导下转染COS7细胞，以
测S1、M和N基因的转录产物，用间接免疫荧光检测S1、M和N基因的表达产
物。结果表明，构建的重组质粒所携带的目的基因可在COS7细胞中正确转录出
pVAXl的细胞孑L无任何特异性荧光，构建的6种重组质粒所携带的目的基因在
COS7细胞中能正确地进行翻译，且表达产物具有免疫反应性。
研究为研制IBVDNA疫苗提供了基础材料。
基金项目：国家863项目(2006AAl0A205)资助。
作者简介：张有峰(1979一)，男，河南西峡人，硕士研究生，主要从事畜禽传染病研究，E—mail：
xinfan91206@163．com；
木通讯作者：王红宁，博士，教授，博士生导师，主要从事预防兽医学、微生物分子生物学研究。
E．．mail：whongning@163．com
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