高通量测序技术及其在植物研究中的应用.pdfVIP

2012正 辽 宁 林 业 科 技 2012 第 4期 JournalofLiaoningForestry Science Technology No4 高通量测序技术及其在植物研究中的应用 冯 健 ，赵雪崴 (1．辽宁省林业科学研究院，辽宁 沈阳 110032；2．辽宁省林业调查规划院，辽宁 沈阳 110122) 摘 要 ：随着 “后基 因组时代”的到来，国际学术界 已经认识到发展快速低成本测序技术的重要 性。在这样的背景下，高通量测序技术应运而生，其代表性技术平台有Roche的454测序技术、 Illumina的Solexa测序技术和ABI的Solid测序技术。笔者通过查阅相关文献，系统回顾了第1代 测序技术发展过程，详细叙述了高通量测序技术原理和方法，探讨了高通量测序技术在植物分子 生物学研究中的应用。 关键词：高通量测序技术；测序技术；植物 中图分类号：Q503 文献标识码 ：A 文章编号：1001．1714(2012)04—0029．07 2003年4月 14日，美国人类基因组研究项 目首 速度就呈指数增长，与半导体工业发展的摩尔定律 席科学家CollinsF博士在华盛顿隆重宣布：人类基 (Moore’SLaw)非常相似2[-3~。这种高速的发展，推 因组序列 图绘制成功 ，人类基 因组计划 (Human 动了基因组学及其分支乃至其他密切相关学科的 GenomeProiect，HGP)的所有 目标全部实现。这标 创立与发展，诸如比较基因组学、生物信息学、系统 志 “人类基因组计划”胜利完成和 “后基因组时代” 生物学以及合成生物学。经过几十年的发展，DNA (PostGenomeEra，PGE)正式来临 。进人后基因 测序技术大致可分为3个时期 ，第 1时期 ，1977年 组时代，功能基因组学 、系统基因组学等研究越来 Maxam和Gilbea报道了通过化学降解测定DNA序 越受到重视，与之相应的是对测序技术的需求有增 列的方法。同一时期，Sanger发明了双脱氧链终止 无减，传统的测序方法已经不能满足深度测序和重 法。20世纪9O年代初出现的荧光 自动测序技术将 复测序等大规模基因组测序的需求。国际学术界 DNA测序带人 自动化测序的时代H】。第2时期为 已经清醒地认识到发展快速低成本测序技术的重 最近几年发展起来的高通量测序技术，如Roche的 要性。2006年 l0月美 国加州 SantaMonica的x 454测序技术、Illumina的Solexa测序技术、ABI的 Prize基金会承诺给第 1个实现 1000美元人类全基 Solid测 序 技 术 、PolonatorG．007。 Complete 因组测序的个人或单位颁发 1000万美元的奖金， Genomics公司最近推出基于其专利技术的测序服 成为有史以来生物医学领域奖金额度最高的科技 务平台，但该公司并没有表示要在市场销售这一设 奖，足见人类科学对测序技术的需求。正是在这样 备。目前 ，基于单分子读取技术的第3代测序技术 的背景下，高通量测序技术应运而生，其代表性技 也 已出现。 术平台有Roche的454测序技术、Illumina的Solexa 1977年，英 国剑桥的FredSanger和美国哈佛的 测序技术和ABI的Solid测序技术。这些技术的共 AlanMaxam和WalterGilbea领导的2个研究小组 同特点是高通量和低成本。 几乎同时发明了DNA序列测定方法 ，这为发展快 1 第1代DNA测序技术 速高效的DNA测序方法带来了曙光。Sanger的方 自20世纪70