pbf启动子在小麦离体胚乳中的特性分析.pdfVIP

维普资讯 农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiotechnology 2007，15 (6)： 1070～1071 · 研究简报 · pbf启动子在小麦离体胚乳中的特性分析 ：tc 苗红梅 ¨，赵永英，易明林，郅玉宝 (河南省农作物新品种重点实验室，郑州450002) 关键词：Pbf启动子；小麦；胚乳；瞬间表达 中图分类号：S188 文献标识码：A 文章编号：1006—1304(2007)06—1070-02 CharacterizationofPbfPromoterinWheatEndosperm ／nvitro M 1AOHong-mei¨，ZHAOYong—ying，YIMing-lin，ZHIYu-bao (HenanKeyLaboratoryforNewCropImprovement,Zhengzhou450002,China) X眄_呻k pbfpromoter；wheat；endosperm；transientexpression 小麦醇溶蛋白盒结合因子 (prolamin-boxbindingfactor， 引物反义链：TCTGCAGCACATGTGTACACACAT。 PBF)是小麦胚乳特异的基因表达调控蛋白因子之一。PBF因 PstI 子主要调控小麦 、大麦及玉米等作物籽粒中贮藏蛋白基因的 PCR反应条件 ：94℃预变性 5min后加入 TaqDNA聚 活性 (Menaeta1．，2002o小麦Pbf基因的启动子序列已由本 合酶；94℃变性 1rain；94℃变性 lmin，55℃退火 1min，72 实验室克隆(ChenetaL，2002o本实验依据pbf启动子序列 ℃延伸 1min，30个循环；72℃延伸 10min；4℃。 中的基序分布和限制性内切酶位点分布，构建了5、3和中 1．3 pbf启动子各缺失体表达载体构建 间缺失以及pbf完整启动子的GUS表达载体 (pb￡a~d)，并 设计并构建了表达载体pb~a~pbf．d (图2)。pCAMB1A 在小麦胚乳中转化，并对pbf启动子进行了初步的功能分析。 138lz载体购自澳大利亚CAMB1A公司。内切酶、连接酶、 TaqDNA聚合酶等试剂购 自TaKaRa(大连)。 1材料和方法 1．4 基因枪转化程序 1、1小麦材料 使用BioRad／PDS一1000型基因枪进行质粒转化。直径为 小麦 (Trificumaesfivum )栽培品种郑麦 9023由河南省 1．6real的金粉制备过程及转化步骤参考BioRad基因枪仪使 农业科学院提供。基因枪轰击材料选用8～10DPA(dayspost 用标准方法。转化条件为：选择压力7584kPa，靶距9cm。在 anthesis)小麦胚乳 。胚乳材料处理方法参考 Miaoeta1． 进行基因枪转化时 ，每种质粒设置2个重复 (每次轰击 1皿， (2004)。在剥离当天，以同心圆方式将胚乳集中摆放于高渗培 20个胚乳 ／皿)，实验同时设置 1个阳性对照(pC^佃IA 养基(MS基本培养基 ，2,4一D1．0mg／L，甘露醇0．4rag／L)I-作 1301载体)及 1个阴性对照(无质粒，仅用金粉轰击)。 为基因枪转化受体备用，每皿20个胚乳。 1．5 转化后小麦胚乳的培养及GUS活性检测 1．2 带有 pD，启动子序列的中间载体及 PCR扩增