pGenesil-1-MCHR2-shRNA对MCHR2与其放射性配体结合的影响.pdfVIP

维普资讯 第24卷第4期 (第5页) 湖北民族学院学报 ·医学版 Vo1．24No．4P．5 2007焦 JournalofHubeiInstituteforNationalities·MedicalEdition 2007 pGenesil一1一MCHR2一shRNA对 MCHR2与其放射性 配体结合的影响 袁成福 湖北民族学院医学院(湖北 恩施445000) 【摘要】目的 研究人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因特异的小发夹 RNA(shRNA)真核表达载体 (pGenesil一 1一MCHR2一shRNA)对MCHR2与其放射性配体结合特征的影响。方法 将pGenesil一1一MCHR2一shRNA表达 载体转染到稳定表达人MCHR2基因的中国仓鼠卵巢细胞CHO中，通过放射性配体结合实验(RBA)检测受体最大 结合容量 (B一)及平衡解离常数(Kd值)的变化。结果 与转染pGenesil一1空载体组比较，pGenesil一1一MCHR2 一 shRNA使Bmax减少39．4％ ～78．7％，Kd值升高40．9％～81．9％。结论 MCHR2基因shRNA真核表达载体能 有效减少B 、升高Kd值，为利用 RNA干扰技术研究人MCHR2基因功能奠定良好的实验基础。 【关键词】MCHR2；shRNA真核表达载体；放射性配体结合特征 【中图分类号】R338．2 【文献标识码】A 【文章编号】1008—8164(2007)04—0005—05 EffectsofHumanM CHR2shRNA Bindingof RadioLabeledLigand toM CHR2 YUANCheng—fu (MedicalCollegeofHubeiInstituteforNationalities，Enshi445000，China) 【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofhumanmelanin—concentratinghormonere— ceptor2(MCHR2)specificshRNAeukaryoticexpressingvectoronbindingofradiolabeledlig— andtoMCHR2．MethodspGenesil一1一MCHR2一shRNAwastransfectedintoChinesehamster ovary(CHO)celllinestableexpressinghumanMCHR2．Thechangesofmaxmum binding (B 。)anddissociationconstant(Kdvalue)wereanalyzedbyradioligandbindingassay(RBA)． ResultsComparedwiththegrouptransfectedwithpGenesil一1blankvector．theBmaxwasde— creasedbyabout39．4％ ～78．7％ ，theKdvaluewasincreasedbyabout40．9％ ～81．9％．Con． clusionThespecificshRNA eukaryoticexpressingvectorofhuman MCHR2reduced B 。，in— creasedKdvalue．Itprovidedsolidexperimentfoundationforfurtherstudiesonthefunctionof MCHR2byRNA intederence． 【Keywords】MCHR2；shRNAeukaryotic