PD—L1分子在肺癌细胞株上的表达及其对T细胞杀伤的拮抗作用.pdfVIP

维普资讯 州医学}2007年第 3O卷第 2 81 PD—L1分子在肺癌细胞株上的表达及其 · 论著 · 对 T细胞杀伤的拮抗作用 陈成。 穆传勇。 瞿秋霞 朱一蓓0 雷伟。 张学光。 黄建安。 [摘 要] 目的 探讨PD—L1分子在肺癌细胞株上的表达及其对T细胞发挥杀伤效应的调节作用。 方法 采用常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导DCs，并经凋亡肿瘤和激发型CD40单克隆抗体 刺激获得成熟DCs，与 自体 T细胞共育后获得肿瘤特异性 CTL细胞；流式细胞术检测肺癌细胞上PD— L1分子的表达；JAM 法和单抗阻断实验分析 CTL细胞对肺癌细胞株的杀伤效应，ELISA法检测细胞 培养上清中IFN一7的含量。结果 经凋亡肿瘤细胞负载的成熟可诱导 自体T细胞分化为肿瘤特异性 CTL；Hl299高表达PD—L1分子(90．3％±4．2)，而A549低表达PD—L1分子(19．4％±5．2)；CTL 对A549具有高效特异的杀伤力，而CTL对Hl299不能有效杀伤，但联合应用PD—L．单抗可显著促 进 (L对Hl299的杀伤作用和 IFN一7的分泌(P0．05)。结论 PD—L1分子在肺癌细胞株上有表 达，且可拮抗 CTI对其的杀伤效应。 [关键词] 细胞毒 T细胞 肺癌 PD—Ll 肺癌是严重威胁人类健康的重大疾病，也是预后 取对数生长期的H 1299、A549细胞与 10El0及相 最差的恶性肿瘤之一，且有相当部分患者在确诊时已 应的同型对照 IgO在4E孵育30min，洗涤后再加入相 属晚期，病情进展快。目前认为，肿瘤细胞逃避宿主免 应的二抗4E孵育 30min用 PBS缓冲液洗涤2次后， 疫系统的攻击是通过一定机制影响机体不能产生有效 重悬细胞并经FCM 检测细胞表面 PD—L．分子的表 的抗肿瘤免疫应答。业已证实，机体的抗肿瘤免疫主 达。 要为T淋巴细胞所介导，但因受到肿瘤细胞本身及外 1．3 肿瘤特异性CTL的体外诱导及细胞毒实验 在多种因素的影响，机体的肿瘤抗原特异性 T细胞处 1．3．1 人外周血单核细胞来源 DC的体外扩增及诱 于免疫耐受状态。新近发现的共刺激分子 PD—L． 导 常规方法 Ficon分离健康人抗凝外周血单个核细 (programdeath—lligand，又命名为 B7一H1)因其在 胞(PBMC)，含 l0％FCS的RPMI1640培养基调整细 癌组织上广泛表达且参与肿瘤的发展，已成为免疫学 胞密度至3×10／ml于6孔培养板中37℃培养 3h，轻 和肿瘤学的研究热点[1~3J。鉴此，本研究利用单克隆 轻吸去未贴壁细胞，经预热PBS洗涤2遍，收集未贴 抗体检测肺癌细胞株上 PD—L．分子的表达，并利用 壁细胞于一80℃冻存备用。贴壁细胞中加入DC培养 阻断实验进一步分析其在细胞毒 T细胞 (CTL)杀伤 基 (rhlL一450ng／ml、rhGM—CSF100ng／m1)于 5％ 肺癌细胞过程中的生物学作用。 C02，37℃培养，每两天半量换液。 l 材料与方法 1．3．2 肿瘤抗原负载DC H 1299和A549细胞与 1．1 主要试剂与材料 淋巴细胞分离液 Ficoll上海 肿瘤化疗药物顺铂DDP(0．5mg／10)细胞共育 3h， 生化试剂二厂生产，肝素抗凝的健康人外周血来 自健 诱导凋亡。培养至第6d的IX2后按 3：l的比例加入 康献血者，细胞培养板 (美国Cos