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PVY、CMV双价抗性RNA沉默表达载体的构建.pdf
维普资讯
PVY、CMV双价抗性 RNA沉默表达载体的构建
王凤龙 ,吴元华
1.沈阳农业大学 沈阳市东陵区马官桥 110161
2.中国农业科学院烟草研究所 青 岛市崂山区科苑经四路 11号 266101
关键词:片段克隆;载体构建 ;RNA沉默;双价抗性
摘要:采用 RT.PCR方法克隆了PVYCP基 因、PVYHC-Pro基因、CMVCP基 因和 CMV2b基 因
的保 守片段 .分别将 PVYCP片段 和 CMV 2b片段 、PVY HC—Pro片段和 CMV2b片段 、PVY
HC.Pro片段和 CMVCP片段连接起 来,以此为靶标构建并得 到 3个 RNA 沉默表达载体
pCAMPb、pCAMHb和pCAMHP。获得的载体可以应用于植物转基因抗病毒育种工程中。
中图分类号 :S572.035.3 文献标识码:A 文章编号:1002—0861(2007)12—0055—05
ConstructionofPVY and CM V BinaryVirusResistantRNA SilencingVector
WANGFENG-LONG(1,2)andWUYUAN·HUA(1)
1.ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang110161,China
2.QingzhouTobaccoResearchInstituteofCNTC,Qingdao266101,Shandong,China
Keywords:Fragmentclone;Vectorconstruction;RNA silencing;Binaryviursresistance
Abstract:UsingRT-PCR method,theconserved fragmentofPVY CP gene,PVY HC-Progene,
CMV CP geneandCMV 2bgenewerecloned,thenthefragmentsofPVY CP andCMV 2b,PVY
HC.ProandCMV2b.PVY HC.ProandCMV CPwereconnectedrespectively.ThreeRNA silencing
vectors,pCAMPb,pCAMHbandpCAMHP,wereconsturctedusingtheconnectedfragmentsasthe
target,andtheconsturctedvectorscouldbeused inplanttransgenicviur sresistancebreeding.
马铃薯 Y病毒 (PotatoviursY,PVY)和黄瓜 (doublestrandedRNA,dsRNA)介导下 ,由生物体
花叶病毒 (Cucumbermosaicviurs,CMV)在我 国 内的核酸 内切酶 Dicer将其切割成 21-24nt的小
各烟区均有发生,其株系分化复杂 ,复合侵染能相 分子干扰 RNA(smallinterferingRNA,siRNA),
互加重病害的症状 ,造成很大的损失… 。应用双 通过siRNA激活 RNA介导 的沉默复合物 (RNA-
价抗性 的品种可 以减少危害。RNA沉默 (RNA inducedsilencingcomplex,RISC),特异性降解与
siRNA 同源 的靶标 mRNA,而达到基因沉默 的 目
★ 烟草科技 rr0F∞一一0∽一.e昌一 鼢rr一lI昌0—0gy★ ★ 病虫害防治 ts0∞∞0鼢Pe∞ 0目I.0一★
silencing)是植物对病毒的一种防御机制 ,可 以获
得高水平 的抗 性。RNA 沉 默是 在 双链 RNA 的 J。Kalantidis等 将 CMVcDNA的反向重复
序列导人烟草中获得一个完全抗性 的转化系 ,并 N
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