鼠假野生型p53-172亮氨酸突变强抑癌作用.pdfVIP

鼠假野生型p53-172捌睫突变的强抑癌作用 鼠假野生型p53．172亮氨酸突变的强抑癌作用 昊秉铨谢建武方伟岗郑杰惠培李宝林 负显性突变型p53是肿瘤发生的最常见基因改变。基因治疗曾建立野生型p53方案，就 是针对负显性突变型p53基因的。文献报道野生型p53eDNA导人人肿瘤细胞，显示了一定 的抑制作用Ll 表达p53—172瓶t的突变型转基因鼠出现乳腺小叶脾泡发育不良，在化学致癌剂作用下生癌 延迟【2-3J。我们以前的研究曾证实。p53—172元曩醴突变型导人人肿瘤细胞系，对癌细胞有强抑 瘤效应L4J，说明该其因在基因结构上有突变，而生物功能上实属野生型作用，称为特异突变型 或假野生突变型。本实验通过观察p53下游基因表达变化，进一步证实转染细胞不能形成克 隆的作用机制，也再次肯定假野生型突变p53的抑瘤效应是一系列基因调节的结果。 材料与方法 1．细胞培养PG细胞系来自人肺巨细胞癌，裸鼠移植瘤有稳定的高转移性【5J。基因检 细胞共转染1p-g构建基因载体和0．1 YgpCMV-neo质粒，在G418(500pg／m1)的培养基中筛 ‘ 选转基因克隆，并以pCMV-neo转染为对照。 ． 3．外源性基因表迭检测 7 ACCGAGACcO四GGG3’；5 C[AG叮GOAGGTGTGGCG3’。细胞总RNA采用 国Prtmaega公司)标记鼠p53eDNA探针，一70℃放射自显影。 4．蛋白印速实验蛋白取自转染后24～48h的转染细胞，包括野生型、假野生突变型、负 p21WAPI／C”I、鼠抗人iTldm2为第一抗体，未经转染的PG细胞为对照。 结 果 作者单位：101_)083北京医科大学病理学系(吴秉铨谢建武方伟岗郑杰)；美国耶鲁大学医学院(惠培 李宝林) 中国癌症研究进展@ 删 品H Exon 、II mⅣ V VI Ⅶ ⅧIX’ X+Ⅺ rq 二‘ 一 圈 Intron／VeetorCMVPmmotor A Exon SV40+poly 田1野生型fPBL106B)、假野生型(PBL106I))和突变型 (PBL102)鼠p53徽基因结构性真棱表达质粒载体．图示真核表达基固元件。该 DNA构建于pBL删pt质粒骨集上 别和pCMV-neo共转染，转染细胞都生长不良，观察5周也不能获得生长的细胞克隆。 328 kb 1。 外源性鼠p53mRNA(图2)。 ， 蛋白．蛋白问相互作用。既可激活，也可抑制许多基因的转录功能。本实验检测了p21”10“、 转染细胞的p21””170”和mdm2基因表达水平明显上调，突变型转染细胞表达水平下调。 BAX基因的表达在实验和对照组间差异不明显(图3)。 讨 论 p53基因突变是肺癌最常见的基因改变，这种改变以负显性作用导致野生型p53蛋白抑 癌功能的丧失。利用野生型p53体外或体内导人肿瘤细胞，在实验动物或临床都已有探索性 工作。。两3基因突变有些常见的错义突变的热点．如人类肿瘤在175密码子。而本实验室所 研究的鼠p53172密码子，相当于人p53175密码子。在我们过去的研究中，由于鼠p53第 172密码子o+