缺氧与血管紧张素Ⅱ对成人冠状动脉内皮细胞NOS与NO的影响.pdfVIP

2007海河之滨心脏病学文章汇编 基础研究 缺氧和血管紧张素Ⅱ对成人冠状动脉内皮细胞NOS和No的影响 ‘田风石2张宏葛进 天津市公安医院心内科’ II)对成人冠状动脉内皮细胞一氧化氮合酶 [摘要】目的研究缺氧和血管紧张素Ⅱ(Ang (Nos)活力和一氧化氮(No)含量的影响。方法将培养的第三代成人冠状动脉内皮细胞分 为对照组、缺氧组、AIlgⅡ组和缺氧+AngⅡ组，加入AngⅡ作用于上述细胞培养36小时， 其中缺氧组最后4小时在5％C0d95％N2的缺氧环境下进行培养，然后检测No含量及NOS活力。 结果缺氧和AIlgⅡ均能显著降低NOS活力及N0含量；与缺氧组及AngⅡ组相比较，缺氧+Aug Ⅱ组能进一步降低NOS活力和N0的含量。结论缺氧和AngII均能造成成人冠状动脉内皮细 胞损伤，且二者具有协同作用 、 关键词-缺氧；血管紧张素Ⅱ； 成人冠状动脉： 内皮细胞；一氧化氮；一氧化氮合酶，． 血管内皮功能异常是发生动脉粥样硬化(AS)的始动因素，并能加速AS的发展。近年 来研究表明，AngII可引起内皮细胞损伤，并诱导低密度脂蛋白(LDL)氧化，促进平滑肌 细胞增殖，从而参与AS形成和发展n一1，而缺氧为血管内皮细胞损伤的常见因素．本研究旨 在观察缺氧和AIlgⅡ对成人冠状动脉内皮细胞功能的影响。 ． 材料与方法 1．主要试剂：AngII和I型胶原酶购自美国Sigma公司；I)MEM粉剂和胰蛋白酶购自美国 金桥生物技术有限公司；N0及NOS试剂盒购自南京建成生物工程研究所． 2．方法：(1)成人冠状动脉内皮细胞的培养和鉴定嘲。(2)当细胞传至第2代时，将其以 2．5x 10‰日l的浓度，接种于5=1大小的培养瓶中，待细胞数达培养表面6096时加入AngⅡ， 再培养36小时，其中缺氧组最后4小时在5％c02／95眦的缺氧环境下进行培养．(3)实验分 组：对照组：为无血清的DMEM培养液；缺氧组；AugII(浓度为10ll=ol／L)组；缺氧+Ang ll II(浓度为10mOl／L)组，共重复4次。(4)培养细胞的前处理：将药物作用36小时后 的细胞消化，离心，弃上清，加生理盐水将所沉淀细胞制备成107／pl的匀浆，-20℃下反 复冻溶3次以破碎细胞。(5)NO含量测定：采用硝酸还原酶法将N筲还原为N町，通过Gress 显色分光光度计，在550n=波长下测定吸光度，并根据公式计算No含量。(6)NOS活力测 定：NOS催化左旋精氨酸(L-Arg)和分子氧反应生成No，No与亲核性物质生成有色化合物， 在530nm波长下测定吸光度，根据吸光度的大小可计算出NOS活力。 3．统计学方法：所得数据以X+s表示，组间比较采用t检验，PO．05有统计学意义． ● 结果 1．缺氧对成人冠状动脉内皮细胞No含量和NOS活力的影响(表1)：缺氧组No含量和NOS 活力明显低于对照组(P0．05)。 活力明显低于对照组(P0．05)。 3．与缺氧组相比，缺氧+AngⅡ组的NOS活力和N0含量均显著降低(P0．05)，见表1。 基础研究 2007海河之滨心脏病学文章汇编 表1缺氧和A略Ⅱ对内皮细胞NOS活力及N哈量的影响Z士S 注：AngⅡ代表血管紧张素Ⅱ 讨论 。 N0是由卜精氨酸在NOS作用下产生的，NOS是N0生成的关键酶，主要来源于内皮细 胞和单核巨噬细胞。在正常血管内皮细胞，No具有强大的舒张血管，抑制血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖，抑制血小板黏附和血栓形成，减轻氧自由基造成的血管内皮损伤的作用‰目． 缺氧可导致内皮细胞蛋白酶、脂肪合成酶A2等酶激活，并促使黄嘌呤脱氢酶向黄嘌呤氧 化酶转化，促进多种氧自由基，如超氧阴离子(町)、羟自由基(