丙肝病毒(HCV)基因和其抗原在人肝内胆管细胞癌中的表达和意义.pdfVIP

丙肝病毒(}ICv)基因爰其抗原在人肝内胆管细胞癌中的表达厦意义 73 丙肝病毒(HCV)基因及其抗原在人肝内胆管 细胞癌中的表达及意义 王文亮王春杰王冰枫 在人原发性肝癌中，肝细胞肝癌较多见，而肝内胆管细胞癌(ChC，包括肝、胆管细胞混合 型癌)比较少见，占8％～10％…1。长期以来，人们对肝内胆管细胞癌的病因及发病机理了解 甚少．有学者认为与中华分支睾吸虫感染有关12’3J。近年来研究证明，肝内胆管细胞癌的发生 密切相关外，也与HCV感染有关；那么肝内胆管细胞癌的发生除与HBV感染密切相关外，是 否也与HCV感染有关?为此，我们采用免疫组织化学技术及原位分子杂交技术，在肝内胆管 细胞癌中检测HCV基因及其抗原的定位、分布状态，并分析其在肝癌发生中的作用，旨在进 一步探讨ChC的病因及发病机理。为防治肝癌提供可靠的理论根据。 材料与方法 40例人ChC为外科手术切除标本，来自本校附属医院病理科。10％福尔马林固定，石蜡 NS3区 采用原位分子杂交技术检测HCV基因(HCVRNA)。免疫组化主要试剂来源：HCV C33c抗体由北京医科大学肝病研究所陶其敏教授惠赠，抗HCV核心区抗体由北京军事医学 Lab，其操作基本接试剂盒内 科学院基础所逯好英教授惠赠。ABC试剂盒购自美国BioGenex 7 非编码区cDNA的pGEM2质粒由北京军事医学科学院提供。地高辛标记试剂盒购自德国 Boehringer 辛随机引物法标记探针。原位分子杂交步骤按常规方法进行。对照组设置：阳性、阴性、空白 及替代对照。 结 果 (一)病理学特点 40例肝癌标本，经病理检查30例为肝内胆管细胞癌，10侧为肝一胆管细胞混合型癌。肝 内胆管细胞癌呈管状腺样结构，多为立方状细胞围绕成小的管腔，有的为高柱状细胞围绕成大 小不等的管腔，有少许粘液分泌。有的病例为团块状排列，癌细胞较小，胞浆少许。纤维结缔 奉课题受国家自然科学基金项目资助(No 作者单位：710032西安，第四军医大学肿癌研究所 74 申国癌症研究进展 组织较丰富，腺管状结构及细胞团块不规则分布于纤维问质中。棍合型癌表现为腺管状结构 和肝细胞癌条索或团块状混合分布，并相互有过渡现象，在个别病例偶见疆汁分泌。癌细胞有 一定的异型性，但核分裂相比较少见。在40例肝内胆管细胞癌标本中，33例伴有癌旁肝组 ‘ (--)HOtC33e抗原及核心抗原的检测 ? 在35例肝内胆管细胞癌及2l例癌旁肝组织中进行了HCVC33c抗原及核心抗原的检 测。HCV C33c抗原及核心抗原在肝内胆管细胞癌及其癌旁肝组织中的检测结果见表1。 寰1癌组织殛其癌旁肝组织中IIcvC33c、核心抗僚阳性结果殛检出率【％) 统计学分析表明，C33c抗原在ChC癌旁肝组织中的检出率明显高于其在癌组织中的检 为棕黄色细颗粒状，位于癌细胞及肝细胞的胞浆内。阳性细胞分布呈：散在型，在切片中阳性 细胞少数分散存在；局灶型，少数阳性细胞呈簇分布于切片中；弥漫型，多数阳性细胞弥漫分布 于切片中。本组以局灶型多见，其次为弥漫型。HCV核心抗原阳性反应也为棕黄色细颗粒 状，既见于胞核内，也见于胞浆内，或二者同时见于同一病例，甚至同一细胞。HCV核心抗原 少数病例呈弥漫分布。 、 (三)HCVRNA的检测 我们用地高辛标记HCV5 检测，HCV 性率差异无显著性。HCVRNA-eDNA杂交呈紫蓝色阳性信号位于癌细胞胞浆内或胞核中， 呈均匀细颗粒状。癌旁肝以胞浆阳性为主。癌组织中阳性细胞以灶状分布为主，癌旁肝