鸡致病性大肠杆菌1型菌毛fimH蛋白基因克隆和序列分析.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集 鸡致病性大肠杆菌1型菌毛fimH蛋白基因克隆与序硼分析 戴鼎震，杨峰，陈钟鸣，张志成，方光远，张玉红 Emai：dzdai@163．tom) (金陵科技学院动物医学系江苏南京210035 1型菌毛是鸡源致病性大肠杆菌的重要毒力因 2结果与分析 子，为一种蛋白质突起，由fimA及fimH亚单位构PCR产物经0．8～1．0％琼脂糖电泳分析，结果 成，其中fimA蛋白为菌毛结构成分的主体，占 99％，，；mH蛋白被认为与大肠杆菌的粘附有关。 国外有研究表明，fimH基因处于1型菌毛基因的了特异性的目的条带，其大小在903bp左右，与预期 末端，是主要的黏附素和起血凝作用的基因。研究 相符。 表明，fimH基因与鸡大肠杆菌毒力有密切的相关 经DNA—STAR软件分析发现并与国外标准1 性，所编码的蛋白是黏附和致病作用的关键一步。 型菌毛K—12菌株厅蜥H基因序列核苷酸序列比较， fimH基因的变异可导致菌毛黏附功能的丧失，关结果表明，核酸同源性分别为97．89％、97．56％、 于禽源大肠杆菌1型菌毛fi优H基因的序列、抗原98．22％。应mH基因序列的比较表明，核酸同源性 性等报道不多。为弄清timH基因序列、变异情况 以及f／mH蛋白等，本实验以鸡致病性大肠杆菌 MGl0(011)、GL7(078)及YRl0(018)为研究对象， 序相似性分别为98．33％、98．33％、99．00％。而预 进行timH基因克隆与序列测定，并预测、分析 rimH蛋白的氨基酸序列、二级结构、亲水性、抗原氨基酸由V变为A，第196位氨基酸由R变为P，第 性，以期为厅优H蛋白的进一步研究提供帮助。 1材料与方法 48位氨基酸由v变为A，第91位氨基酸由N变为 1．1菌株 S，第99位氨基酸由S变为N，第196位氨基酸由R 鸡致病性大肠杆菌MG(011)、GL7(078)及 变为P，第222位氨基酸由H变为T。而且不论是 YRl0(018)分离株，由金陵科技学院动物医学系保 三者之间还是与标准1型菌毛之间，它们的1型菌 存。 毛f／mH基因序列粘附基因启动子、SD序列及终止 1．2质粒及宿主菌 密码子均相同，阅读框架也全部正确。所有菌毛 pMDl8一T质粒、受体菌株DH5a购自Takara公 rimH蛋白信号肽也基本一致。从3株1型菌毛 司。 疗加H基因核酸序列及氨基酸序列比较看，变异范 1．3引物设计 5．0 根据GenBank上发表的序列，运用Primer 氨基酸的二级结构、f／mH蛋白的抗原位点图谱、亲 设计、合成一对引物，置于．20℃冻存。 水性图谱进行预测分析，我们发现它们二级结构、抗 Pl： 5’．GAAGCTTGAGCTGACCCGAAGAA 原位点及亲水性基本相似，这说明f／mH基因序列 GATGA。3’ 及氨基酸序列的变异并未影响f／扰H蛋白的结构。 P2：5’一CGCGGATCCTTATTGTAAACAAA一3’ 由此以推测，鸡源大肠杆菌1型菌毛ti