嗜热放线菌β-葡萄糖苷酶基因的人工合成和功能性表达.pdfVIP

嗜热放线菌β-葡萄糖苷酶基因的人工 合成及功能性表达∗ 裴小琼 吴中柳** ( 中国科学院成都生物研究所 成都 610041) 摘 要 β-葡萄糖苷酶是纤维素降解过程中的关键酶类，为了能够利用分子生物学手段提高β-葡萄糖苷酶 的活性和各项性能，以推动其在生物能源等领域的应用，我们对来源于嗜热放线菌(Thermobifida fusca) 的β- 葡萄糖苷酶 bglC 基因的异源表达进行了研究。首先根据表达宿主大肠杆菌的密码子偏好性对部分密码子 进行了调整，并用基于 PCR 的人工合成方法组装了基因序列，并构建在大肠杆菌(Escherichia coli)表达载 体pET-28a(+)上，在E.coli BL21 中进行表达。活力测试和SDS结果均表明该酶实现了胞内活性表 达，酶蛋白的分子量为53 kDa，这一结果为后续定向进化研究奠定了基础。 关键词 β-葡萄糖苷酶；嗜热放线菌；大肠杆菌；重组表达 De novo Synthesis and Functional Expression of Thermobifida fusca β-glucosidase Gene ∗ PEI XiaoQiong ,WU ZhongLiu ﹡﹡ (Chengdu Institute of Biology, Chinese Academy of Sciences, Chengdu 610041, China) Abstract β-glucosidase is a critical enzyme in cellulase mixtures designed to break down cellulose.To improve enzymatic characterization for industrial application by protein enginerring, the heterologous expression of Thermobifida fusca β-glucosidase gene (bglC) was studied. bglC gene was optimized according to the codon bias of Escherichia coli to increase its expression level. The total gene was synthesised by PCR based method, inserted into the expression vector pET-28a(+) and transformed into Escherichia coli BL21. The results of both enzymatic activity assay and SDSshowed that the recombinant protein was successfully expressed in active form with a molecular weight of 53 kDa. The work has established the foundation for futher study on directed molecular evolution. Key words β-glucosidase; Thermobifida fusca; Escherichia coli ; recombinant expression 纤维素是植物光合作用的主要多糖类产物，占地球总生物量的40% ，是地球上丰富的可再生资源，具 有诱人的开发前景。而且纤维素被纤维素酶水解后，不会对环境造成污染。因此对纤维素资源降解的利用 受到极大的重视。 β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase ，EC1)属于水解酶类，又称β-D-葡萄糖苷水解酶，别名龙胆二糖酶、 纤维二糖酶和苦杏仁苷酶。它可催化水解结合于末端非还原性的β-D-糖苷键，同时释放出相应的配基与葡 萄糖体[1] 。在纤维素降解过程中，β-葡萄糖苷酶将纤维二糖水解为葡萄糖，是纤维素酶系中的一类重要