多功能农药降解基因工程菌剂保藏条件研究.pdfVIP

维普资讯 农业环境科学学报 2008，27(4)：1686—1691 JournalofAgro-EnvironmentScience 多功能农药降解基因工程菌剂保藏条件研究 蒋建东，李 荣，陈 凯，倪 斌，李顺鹏 (南京农业大学生命科学学院，农业部农业环境微生物512程重点开放实验室，江苏 南京 210095) 摘 要：应用多功能农药降解基因工程菌修复农药污染潜力巨大，但由于微生物菌剂的保存一直是个难题 ，直接影响到微生物菌 剂的应用。本实验室构建的基因工程菌属于鞘胺醇单胞菌属，易受到污染而消亡，液态菌剂保藏效果不理想，因此找到一种吸菌量 大，并能增加细胞密度和保持菌种存活力的载体显得尤为迫切。通过单一载体吸菌量的测定、不同剂型保藏试验、不同接种量保藏 试验、保护剂选择试验等方法研究了不同剂型对微生物菌剂活菌数量及保存期的影响。结果表明草炭是一种优良的固体载体—— 吸菌量大，可达 10“CFU·g-t,并能促进工程菌的生长，109CFU·g接种量接种后 120d仍能使工程菌数量维持在 l0sCFU·g水平。 通过盆钵试验表明长期保藏后的微生物菌剂能在25d内将甲基对硫磷和呋喃丹完全降解 ，应用效果不受保藏影响。本实验为工程 菌剂的保存和应用提供了理论参考。 关键词：鞘胺醇单胞菌属；载体 ；保藏试验；生物修复 中图分类号：Q93—336 文献标识码 ：A 文章编号：1672—2043(2008)04—1686—06 StudyontheConservationofMultifunctionalPesticides-DegradingGeneticallyEngineeredMicroorganisms JIANGJian—dong，LIRong，CHENKai，NIbin，LIShun-peng (Collegeoflifesciences，KeyLaboratoryforMicrobiologicalEngineeringofAgriculturalEnvironment，MinistryofAgriculture，NanjingA 一 culturalUniversity，Nanjing210095，China) Abstract：Chemicalpesticidesarefrequentlyappliedinmodem agricultural system toensuregoodharvests．However,theextensiveuseof chemicalpesticidesmayeasilyleadtowidespreadenvironmentalpollution．Thecontrolofpesticidespollutantsisofgreatimportancebecause theyaretoxicna drecalcitrant．Theuseofmicroorganismsofrbioremediationofpesticides—contaminatedsitesmayprovetobeaviablealte卜 nativetophysicalandchemicalclean-upmethods，be causeavarietyofmicroorganismsareknowntoutifizepesticidesashteirsolecarbonor energysource．Becauseofthevariouskindsofpesticide—residuespresentinenvironment，multifunctional geneticallyengineeredmicroor- ganisms (GEMs)playkeyrolesinthebioremediationofpesticidescontaminatedsites．However,thedifficultyoftheconservationofGram negativeGEMswouldbeanobstacletotheapplicationofGEMs．OurpreviouslyconstructedGEMscabapleofsimultaneousdegradingmehtyl parathionandcarbofuranbelongto hingomonasgenus．Thegeneticallyengineeredbacterium declinedquicklyinliquidmediumbecauseit waseasilypollutedandtheconservationofGEMsinliquidphasewasdissatisfactio