基于哺乳动物双杂交技术靶向HIV-1gp41新抗HIV进入抑制剂药物高通量筛选模型建立.pdfVIP

基于哺乳动物双杂交技术靶向 HIV-1 gp41 的新抗HIV 进入抑制剂药物高通量筛选模型的建立 1 1 2* 2 2 2 水小溪 ，刘晨 ，郑智慧 ，路新华 ，张华 ，贺建功 1 河北师范大学生命科学学院，石家庄 050016 2 华北制药集团新药研发中心天然药物室，石家庄 050015 摘要：gp41 是 HIV-1 表面的包膜糖蛋白(Env)成分，介导了病毒膜和宿主细胞膜间的融合， 在 HIV-1 的侵染过程中起关键作用。gp41 中的N 末端重复序列（NHR ）和C 末端重复序列 （CHR ）通过相互作用形成关键的核心三聚体发夹状结构，从而介导HIV 膜和宿主细胞膜 的融合过程。抑制 gp41 中的NHR 和 CHR 的核心三聚体形成已经成为抗HIV 药物的新靶点。 本研究利用哺乳动物双杂交技术检测蛋白之间相互作用的原理，建立新的靶向 HIV-1 gp41 抗 HIV 药物高通量筛选模型。将 PCR 扩增的 gp41 NHR 和 CHR 基因片段分别连接至哺乳 动物双杂交的 pACT 和 pBIND 载体上构建表达载体 pACT-NHR 和 pBIND-CHR ，用脂质体 与已经构建好的报告质粒 pGl3-GAL4 进行共转染动物细胞。通过检测荧光素酶基因的表达 水平定量评价化合物对 NHR 和 CHR 的相互作用的拮抗活性。经过多种条件的优化，使得 筛选模型的信号本底比达 10，Z’ 因子大于0.5 。阳性对照化合物XTT 在本模型中可以浓度 依赖地降低荧光素酶的表达，其 IC50 为 13.54µg/mL （20.1µM），证明该模型具有很好的灵 敏度和稳定性，可以用于大量药物筛选。本研究建立的全新靶向 gp41 的抗HIV 小分子药物 筛选模型，为发现和研究新一代的抗 HIV 药物研究打下坚实的基础。 关键词：gp41 ；NHR ；CHR ；哺乳动物双杂交；高通量筛选 A mammalian two-hybird system based High-throughput screening assay for HIV enter inhibitors targeting gp41 1 1 2* 2 2 2 Xiaoxi Shui , Chen Liu , Zhihui Zheng Xinhua Lu , Hua Zhang , Jiangong He 1 College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang, 050016, China 2 Drug Research Development Center of North China Pharmaceutical Group Corporation, National Microbial Medicine Engineering Research Center, Shijiazhuang, 050015, China Abstract gp41 is a major component of the envelope glycoprotein of the HIV-1 membrane, which is responsible for the membrane fusion between the virus and cells. The interaction of its N-terminal heptad repeat (NHR) and C-terminal heptad repeat (CHR) play a key role in the membrane fusion process by forming a trimer-of-hairpins fusion-active gp41 core structure. So the inhibition of formation of 作者简介：水小溪（1984-），女，汉族，河北省保定市人，硕士研究生，研究方向为抗HIV 天然药物筛选