mBinlb防御素调控细胞基因表达比较蛋白质组学初步研究.pdfVIP

化 学 世 界 mBinlb防御素调控细胞基因表达的比较蛋白质组学初步研究 晁阳1．李通化“，唐胜男1．万耘寒2 (1目许大}化}§，±*．200092{2±*南^#i±自W究十0，±*，∞1203) 荚键词：抗茼肢；＆nIb；比较蛋白质组学；质谱；咸向电泳}曩肢 抗蔼胀是生物体内天然存在的一粪具有杀灭细 士建立，证实与Bhlb过表达转基因小鼠具有一些 菌和真菌等多种病原微生物Ⅲ的30～80氨基酸的 小肚。有些抗菌肚还具有杀灭病毒和癌细胞的作 用嘲，此外有些抗苗肚还具有促进精于运动，免疫调 DMEM细胞培养基(H”10ne)于10dndlsh中在 节等多种作用。2001年3月张永莲研究组在《Sci一37℃5“0旺条件下培养。细胞用PBs漂洗后， 硼》杂志上发表《在生殖系统中的一个天然抗菌 0 肽}一文o]，报道n!b是在大鼠附睾中专一表达的后PBs漂洗，用博大泰克细胞蛋白抽提试剂盒抽提 抗菌肽，这是首次发现的哺乳动物生殖细胞抗苗肽． 细胞总蛋白，Bradford法测蛋白浓度，分装后一80℃ 推铡可能与生育相关t引起世界性的关洼。Binlb 保存备用。 及其人、鼠同源基因仅在附睾的头体部的上皮细胞 中专一表选．在体外证实具有抗菌活性。后来研究 证明B·Ⅱ1b能促进来成熟精于的运动[．]。费俭等目 前正在进行的一项关于m尉n1“”(小鼠Binlb)的 研究中发现B—nlb能影响免疫系统的抗炎症应答。 他们发现Binlb过表达小鼠和Ⅸnlb稳定转染细胞 具有—些相同的表型．为了深^研究Bhdb调节基 固表达的机制，本文试冒用蛋白双向凝胶电泳分析 ，——1—10 3 实验从蛋白质水平找出由Blnlb基因高表选引起蛋 白质水平的变化。 图1 aB砒b稳定转染细胞噩白差异点巾野生型R¨1细胞 l材料与方法 蛋白差异点 I 1试剂与仪器 1．3双向凝腔电泳(}DE) IPG干腔条(pH3～10，18锄，nonlmear)， IPD Bufkr、尿素、TnsBa辩、cHAPs、十二烷基确 s}蛐Pha肿acla公司)进行，选用24clIl干胶 酸钠(sDs)、甲叉双丙烯酰胺、二硫苏糖酵(UTT)、(pH3，】OnL)，泡涨上样200 pg_IEF参数设置l 5 丙烯酰胺、溴酚蓝购自Amen}Iam＆呲nces公300v．1hll000V，1hI5000v，1h；5000v至总vh 2_D 司。碘乙酰胺昀自尉俨Rad公司。Plu80ne B QuantKlt购自Aln盯shamlosclBnces公司。 DALl’twd lPGphor等电聚焦电泳仪，Ettan Syst叽SDs垂直电泳仪，hageScallrIer扫描仪， PAGE)进行，并用双胺镶染法染色。 EttanTA ManedD，P1atlnm- Digener，Imge 1．4图像采集与分析 铀ftware(Ame时lam Ph釉mm)，Tutbivap96氮 气吹干机(zyrnuk)，4700prot咖c5Aml”er质 谱仪(ABI)。 公司，英国)进行背景扣除、标准化、点探铡、匹配以 1．2样品制备