鹅CD4的分子克隆、组织分布和其生物学特性研究.pdfVIP

鹅CD4的分子克隆、组织分布及其生物学特性研究 汪安琪1’ 严晓玲博 汪铭书1’2’3程安春1’2’3 陈 舜1’2’3’ (1．预防兽医研究所，动物医学院，四川农业大学，四川成都611130； 2．禽病防治与研究中心，动物医学院，四川农业大学，四川雅安625014； 3．动物疫病与人类健康四川省重点实验室，动物医学院，四川农业大学，四川雅安625014) 摘要cD4蛋白是属于免疫超家族能够识别MHcⅡ类分子的一种单链跨膜糖蛋白。本研究首次克 号肽区，一个含有4个N一糖基化位点的胞外区，一个跨膜区及一个胞内区构成。氨基酸多序列比对及进化 NA在胸腺中含量最高，其次是脾脏、小肠、脑和气管；在法氏囊、盲肠淋巴结、盲肠、皮肤、肺脏、肾脏和肝脏 中有低水平的表达。在雏鹅的免疫器官中，cD4在胸腺中表达量最高，其次是脾脏、盲肠淋巴结和小肠。然 而在成年鹅的免疫器官中，其在胸腺、脾脏、盲肠中有高表达，在盲肠淋巴结和小肠中表达量相对较低。在建 立的雏鹅感染NGVEV病毒模型中，CD4在脾脏、法氏囊和哈德氏腺中的表达量都有明显的上调，然而在小 肠中，其表达量在感染后第5天明显下调，在感染后第19天表达量又上调接近正常水平。 关键词 鹅；cD4；分子克隆；组织表达；NGVEV感染 1 引 言 T细胞是在胸腺中发育成熟的淋巴细胞。在发育的不同阶段，T细胞表面可表达不同种类分子和T细 胞抗原，T细胞本身的识别活化及效应功能的发挥就与这些受体和抗原密切相关。随着幼稚T淋巴细胞的 MHc II和MHC 活化。因此成熟的T细胞在细胞免疫中发挥着的重要作用。 cD4分子主要表达于部分T细胞、胸腺细胞、单核细胞、巨噬细胞以及树突状细胞的表面。CD4分子的 序列和氨基酸序列还未见报道。 (2013TD0015) #f乍者为并列第一作者。 }通讯作者：陈舜Tel：028Fa)【：028Emajl：s叩hia-cs@163．com 59 四川省畜牧兽医学会2014年学术年会 由于鹅不仅是一种重要的肉食性动物，而且是许多禽类病毒的自然宿主，使鹅免疫系统研究得到了空前 的重视。在病毒感染中CD4+T细胞发挥重要作用，病毒感染后会引起特异性CD4+T细胞大量增殖，而特异 在本研究中，我们首次报道了四川鹅cD4分子的克隆、cDNA序列和氨基酸序列、鹅cD4分子的结构和 龄以下雏鹅的病毒，能引起雏鹅新型病毒性肠炎。检测病毒模型组织中cD4的表达量，揭示了NGVEV感染 后CD4的免疫学功能。本研究成果不仅填补了鹅分子免疫学和细胞免疫机制的空白而且可为阐明水禽类 抗病的作用机制提供理论参考。 2材料和方法 2．1 实验动物和毒株 用于本研究的所有鹅都买自四川农业大学农场。NGVEV—cN毒株由四川农业大学禽病中心提供。 2．2 鹅CD4cDNA的克隆 0【的部分片段。 绿头鸭、番鸭、原鸡和斑马鱼的CD4仅cDNA全长序列设计两个兼并引物并扩增出鹅cD4 运用3’．RACE和5’．RACE技术获得CD40【cDNA的全长。 2．3 鹅CD4基因的核酸及氨基酸序列分析 利用DNAStar软件和SequenceManipulation 氨基酸序列和ORF。利用NcBI中的BLAsT功能分析序列相似性。clustal senrices／)预测功能位点。利用MEGA5构造系统发育树。 2．4鹅CD4的组织表达 选择13日龄鹅和成年鹅的胸腺、脾、哈德氏腺、法氏囊、盲肠扁桃体、胰腺、心脏、肾、脑、肝、肺、小肠、盲 健康雏鹅中不同组织CD4仅mRNA的量。 2．5 感染NGVEV雏鹅的CD4d相对转录水平 为了分析病毒感染雏鹅后免疫相关组织CD4仅mRNA的转录水平，我们对3日龄雏鹅进行了人工感染 悬浮液。感染后的5天和19天，在实验组和对照组中分别随机取一只雏鹅，采取两只鹅的胸腺、法氏囊、盲 肠淋巴结、哈德氏腺和小肠，然后通过半定量RT—PCR检测以上免疫相关组织的CD4仅相对转录水平。 3 结 果 3．1 鹅CD4分子克隆及核酸和氨基酸序列分析 运用3’一RAcE和5 分析显示，其含有4个糖基化位点，同