insitupla技术原位分析mta1与nurd复合体其他组分de相互作用.pdfVIP

论 著{ 《癌症进展》2014年7月第 l2卷第 4期 ONO3LOGYPROZa~ESS,July2014, 12,NO．4 394 InSituPLA技术原位分析MTA1与NuRD复合体 其他组分的相互作用△ 刘健 王海娟 刘群 李春晓 刘欢 黄骁舾 孟希亭 赵枚 林晨 黄常志 钱海利 首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心，北京 100020 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所 分子肿瘤学国家重点实验室，北京 100021 首都医科大学附属北京妇产医院妇科肿瘤，北京 100006 摘要 ：目的 原位检测肿瘤转移相关蛋 白MTA1与NuRD复合体其他组分．Mi2、HDAC2及MBD3的相互 作用并分析MTA1N／uRD复合体在HCT116细胞中的分布情况。方法 首先利用CO．IP技术体外验证MTA1与 NuRD复合体其他组分Mi2、HDAC2及MBD3在HCT116细胞裂解液 中的相互作用 。然后利用InSirePLA技 术 ，体 内原位检测MTA1与三者的相互作用，并根据镜 下阳性荧光信号数 目，比较MTA1与Mi2、HDAC2及 MBD3之间的作用强弱；根据相互作用位点的亚细胞分布情况 ，分析间期及M期MTA1N／uRD复合体 的核质 分布情况。结果 首次从体内原位水平证实MTA1与NuRD复合体其他组分．Mi2、HDAC2及MBD3的相互作 用；其作用强度HDAC2最高，Mi2次之，MBD3最弱；首次发现MTA1N／uRD复合体存在很明显的胞质分布 (约 占总量的 1／4)；另外，我们还首次发现在M 期MTA1／NuRD复合体不再位于核区，而是位于染色体外周 。结论 InSituPLA技术是一项有效的原位检测蛋白相互作用的新技术；MTA1／NuRD复合体可能参与MTA1胞质 中 功能的发挥；并且其胞质分布可能参与M期进程调控。 关键词 ：MTA1；NuRD复合体；相互作用；InSituPLA技术 中图分类号 ：R73 文献标志码：A doi：10．11877，j．issn．1672-1535．2014．12．04．17 InsituanalysisoftheinteractionsofMTA1withNuRD complexcomponents byInsire PLA technology△ LIUJian WANGHai-juan LIUQun LIChun—xiaoLIUHuan HUANGXiao—xiMENGXi— ting ZHAOMeiL1NChen HUANGChang—zhi QIANHai—li MedicalResearchCenter,BeijingChaoyangHospital，CapitalMedicalUniversity,Beijing，100020，China StateKeyLaboratoryofMoleculraOncology,CancerInstituteHospital，ChineseAcademyofMedicalSciences， PekingUnionMedicalCollege，Beijing100021，China BeijingObstetricsandGynecologyHospital，CapitalMedicalUniversiyt,Beijnig100006，China 基金项 目：国家 自然科学基金 81101518) 通信作者 (correspondingauthor)，钱海利 e-mail：qianhailiO01@163．corn；黄常志 e-mail：hunag8849@126．tom