HPV16阳性人宫颈鳞状细胞癌裸鼠动物模型建立和分析.pdfVIP

华东地区第十三届实验动物科学学术交流会 ．151． HPVl 6阳性人宫颈鳞状细胞癌裸鼠 动物模型建立及分析 王康1，王长奇2，巫文勋2，罗娜2，杨志华2，周开良2，李维旭1 (1．南昌大学第二附属医院，江西南昌330006； 2．江西萍乡矿业集团总医院，江西萍乡337000) [摘要]目的采用在裸鼠腋部皮下移植人原代宫颈癌组织的方法，研究其在裸鼠体内的成瘤性，并初 16，HPVl6) 步探讨此动物模型肿瘤的生物学特性。方法将人类乳头瘤病毒16(HumanPapillomaVirus 阳性人宫颈鳞状细胞癌组织移植于裸鼠腋部皮下建立原代人宫颈癌裸鼠模型，成瘤后取出瘤组织传代， 观察瘤体生长情况，60d待瘤长到直经1cm时处死后作病理检查；移植前和移植后用聚合酶链式反应 Chain Reaction．PCR)检测肿瘤组织HPVDNA表达情况，对HPVl6L1和E6、E7基因结构进 (Polymerase 行移植前和移植后基因克隆和测序。结果接种后60d在接种部位可见结节状肿块，80d后肿瘤体积达 HPVl6 E7同义突变2个位点(T843C／C94CT846／$95S)，错义突变1个位点(A647G 比对未发现新的变位点。成功地建立了人宫颈鳞状细胞癌实体瘤动物模型。结论研究所建立裸鼠人宫颈 癌组织模型成瘤率较高，操作简便，可保持人宫颈癌生物学特性，为进一步研究宫颈癌的发病机制提供了重 要的科研工具。建立了hpvl6阳性人宫颈鳞状细胞癌裸鼠动物模型。 [关键词]动物模型；宫颈癌；裸鼠；人乳头状瘤病毒 宫颈癌(cervicalcancer，CC)是妇女最常见的恶性肿瘤之一，仅次于乳腺癌居于第2位。全球每年约 有50万人被诊断为宫颈癌，每隔2min就有一位女性因为宫颈癌而去世，每年约有30万人因此丧生。中国 每年有13万个新发宫颈癌病例，约有3万名妇女死于宫颈癌川。 建立荷瘤动物模型，不但能较真实地评价肿瘤在体内的病理生理过程及药物经活体代谢后对肿瘤的影 建立人宫颈癌模型，为进一步研究宫颈癌的发病机制、治疗及预防策略可提供理想的动物模型。 1材料与方法 1．1实验动物 SPF级BALB裸小鼠，20只，雌性，8～10周龄，体质量18～22 g。由上海市西普尔一必凯实验动物 Ventitaled 【作者简介]王康(1983．)，从事中医药肿瘤防治糖尿病肾病相关基础及临床研究 [通讯作者】王长奇，Tel：(0799．6583311)，Email：wangchangqi5@163．com ．152． 华东地区第十三届实验动物科学学术交流会 min，垫 料再放入电热鼓风干燥箱干燥后使用。 1．2细胞株 诊断：人宫颈鳞状细胞癌(中分化型)。将人宫颈鳞状细胞癌组织移植到裸鼠，建立人宫颈鳞状细胞癌裸鼠原 代移植实体瘤模型的基础上，传代第2代实体瘤。 1．3方法 1．3．1麻醉：用解放军农牧大学军事兽医研究所提供的速眠新846合剂，按0．5 mg·kgJ剂量腹腔注射麻醉 裸小鼠。 1．3．2人宫颈鳞状细胞癌模型制作：采用人卵巢癌裸鼠移植实体瘤模型口一1的方法，将人宫颈鳞状细胞癌荷 瘤裸鼠的实体瘤剪成约1～2mm3大小的组织块，移植于裸鼠右侧腋窝外部皮下。 1．4观察指标 1．4．1将人宫颈鳞状细胞癌组织移植于裸鼠腋部皮下建立原代人宫颈癌裸鼠模型，成瘤后取出瘤组织传代， 观察瘤体生长情况并计算肿瘤体积。 肿瘤体积：V=Ⅱ／6Xa×bxC(a、b、c为肿瘤的长、宽、高)14] 1．4．260 d瘤体长到直经lcm时处死，取出实体瘤作HE染色病理学检查。 1．4．3PCR检测：参照试剂盒说明书，按DNA抽提法分别提取种植前患者