HSV+Ⅰ感染对L-02细胞mRNA修饰翻译体系影响分析.pdfVIP

HSV I感染对L—02细胞mRNA修饰翻译 体系的影响分析 洪敏车艳春唐桂珍李琦涵 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 【摘要】 I型单纯疱疹病毒(HSVI)对宿主细胞mRNA修饰翻译通路的调控是一个系统的、复杂的体 系，探索其具体机制将有助于了解病毒复制过程及宿主细胞的生物学改变。本课题借助比较蛋白质组学的技 术平台，将HSVI病毒感染的人正常肝细胞L4)2与未感染细胞分别进行双向电泳作蛋白质组图，通过 PDQIlest软件对蛋白点定性、定量分析，再利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定出一组与细胞蛋白质 合成途径密切相关的表达差异蛋白点。其中，作为mRNA翻译所需的RPLPl蛋白和参与mRNA快速降解的 KHSRP蛋白呈现上调，而可以正调控mRNA剪切的hnRNP142蛋白则表现为下调。这些结果提示，HSVI能够 借助细胞调控蛋白从mRNA剪切、翻译、降解等多个角度共同影响细胞蛋白质合成过程，在病毒关闭细胞蛋白 合成的同时又为病毒蛋白合成提供最佳环境。尽管上述细胞蛋白的具体作用机制还有待于进一步研究，但本 课题为探讨病毒如何改变宿主蛋白合成途径提供了新的研究线索。 【关键词】 I型单纯疱疹病毒；L-02细胞；比较蛋白质组学 Virus 其它蛋白ET,8|。而在一种系统的范围内分析HSVI I型单纯疱疹病毒(Herpes I，HSV Simplex I)作为具有复杂基因结构的DNA病毒…，在感染 感染细胞中mRNA修饰一蛋白分子翻译合成体系的 不同宿主细胞的过程中，可以因其编码的多种功能 最佳途径，应该基于可以在一定时空范围内分析宿 的病毒蛋白与细胞的特定作用而影响细胞的生物学 主细胞整体变化的比较蛋白质组学技术，以使我们 性质[2]，最终导致不同的感染结局，亦即溶细胞性感 的观察具有时相性、整体性，而目前有较大发展的蛋 染及潜伏性感染【3】。虽然HsvI所导致的这两种不 白质二维电泳(Two-dimension 同感染形式的具体机理尚不完全清楚，但已有的资 技术正是这类比较方法的基础。因此，我们在本文 料表明，HSV工感染所具有的对细胞蛋白合成系统 I感染 描述的工作中，利用这类技术方法、针对HSV 的控制和改造作用则已被确定是此机理中的一个部 人正常肝细胞株L广02的过程，对被感染细胞的系统 分[4】，这样～种作用可以终止细胞多种蛋白分子的 改变作了初步的分析。通过2一DE蛋白电泳，及对差 翻译合成，并使整个mRNA修饰到蛋白合成体系为 异蛋白的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 病毒所用[5]。当然，此类作用作为多种病毒感染的 (Matrix-assisted ionizationtimeof laser-desorption fliIght 共性特点已为人们广泛认识，但就HSVI而言，其在 mass 溶细胞性感染中导致感染细胞在这个方面发生的改 了在HSVI感染L广02细胞过程中，所导致的一组与 变的机理亦非完全清楚。以往的研究认为，HSVI 细胞mRNA修饰及蛋白翻译